Aplikace polymerázové řetězové reakce (PCR)
Polymerázová řetězová reakce (PCR) je výkonná základní technika molekulární biologie, která je účinnou a rychlou in vitro metodou pro enzymatickou amplifikaci specifických sekvencí DNA nebo RNA z různých zdrojů. Standardní PCR se skládá z cílové DNA, sady syntetických oligonukleotidových primerů, které obklopují cílovou sekvenci DNA, termostabilní DNA polymerázy (obvykle Taq polymerázy) a nukleotidů. Při použití termálních cyklérů probíhají během každého amplifikačního cyklu tři fáze, včetně denaturace dvouřetězcové DNA (dsDNA) na samostatnou jednovláknovou DNA, žíhání primerů na cílovou sekvenci DNA a extenze, kdy DNA polymeráza prodlužuje DNA z primerů a vytváří novou dsDNA s jedním starým a jedním novým vláknem. Vlákna syntetizovaná v jednom cyklu slouží jako předloha v dalším cyklu, což vede k milionnásobnému nárůstu množství DNA během pouhých 20 cyklů.
Související produkty
Doporučené kategorie
Molekulární klonování a metody exprese proteinů a protokoly pro spolehlivé klonování a robustní expresi proteinů z hmyzích, bakteriálních a savčích expresních vektorů.
Epigenetická činidla a zdroje pro zkoumání druhů RNA, metylace DNA, modifikací chromatinu a histonů.
Komplexní analýza střevního mikrobiomu: Odhalte komplexní řešení zahrnující přípravu vzorků, sekvenování, bioinformatiku a statistiku. Od 16S po WGS.
Reverzní transkriptázová PCR (RT-PCR)
RT-PCR neboli reverzní transkriptázová PCR je varianta standardní techniky PCR, která zahrnuje amplifikaci specifické mRNA získané z velmi malých vzorků. Eliminuje potřebu zdlouhavého procesu čištění mRNA, který je vyžadován u běžných technik klonování. Při RT-PCR se kromě standardních činidel pro PCR používá reverzní transkriptáza a vzorek RNA. Reakční směs se zahřeje na 37 ˚C, což umožní vytvoření komplementární kopie cDNA ze vzorku RNA pomocí reverzní transkriptázy. Tato cDNA se pak annealizuje na jeden z primerů, což vede k syntéze prvního vlákna. Poté následuje standardní PCR, při níž se nakonec vytvoří dsDNA. RT-PCR se často kombinuje s PCR v reálném čase (qPCR), která se hojně využívá ke kvantifikaci hladin transkriptů v buňkách a tkáních.
Hot Start PCR
Hot Start PCR je technologie, která inhibuje horký start Taq polymerázy nebo inkorporaci modifikovaných dNTP během nastavení reakce, dokud nedojde ke kroku tepelné aktivace. K zastavení aktivity polymerázy s horkým startem jsou k dispozici různé metody, mezi něž patří chemická modifikace, metody zprostředkované protilátkami a metody zprostředkované aptamerem.
Endpoint PCR pro dlouhou a přesnou amplifikaci cílů
Endpoint PCR se často používá ke zjištění přítomnosti cílů a jejich relativního množství po dokončení reakce. Omezená délka sekvencí vznikajících při standardní PCR, přibližně 5 kb, je částečně překonána začleněním dalších faktorů, které zajišťují "proofreading" aktivitu. Dlouhá a přesná (LA) PCR zahrnuje použití druhé termostabilní polymerázy s 3′→5′ exonukleázou k opravě terminálních chybných nukleotidů, což vede k výrazně zvýšené věrnosti a schopnosti amplifikovat cíle DNA o délce až 40 kb.
Vyhledejte v našem vyhledávači dokumentů datové listy, certifikáty a technickou dokumentaci.
Související články
- Problémy s PCR a RT-PCR jsou identifikovány během analýzy gelovou elektroforézou, jako je absence pásů, přítomnost nespecifických zákazů, nadměrné rozmazání a rozmazání pásů.
- Digital PCR enables absolute quantification and detection of minority sequences against similar majority sequences, such as somatic mutations.
- Ethidium bromid je dobře známé a široce používané fluorescenční barvivo v biotechnologickém výzkumu.
- Polymerázová řetězová reakce je jednou z nejpoužívanějších technik v molekulární biologii. Proces PCR se skládá ze tří hlavních kroků: denaturace, žíhání a extenze.
- The purpose of Hot Start PCR is to inhibit the PCR reaction in order to reduce nonspecific amplification, prevent the formation of primer dimers, and increase product yields.
- Zobrazit vše (82)
Související protokoly
- Naučte se standardní kroky protokolu PCR a zkontrolujte seznamy činidel nebo parametry cyklování. Tato metoda pro rutinní amplifikaci DNA pomocí PCR používá standardní Taq DNA polymerázu.
- Žíhání je proces zahřívání a ochlazování dvou jednořetězcových oligonukleotidů s komplementárními sekvencemi.
- Seznamte se s metodami výpočtu teploty tání oligonukleotidů (Tm).
- Variabilita pracovního postupu PCR je ovlivněna zdrojem vzorku, reverzní transkripcí a návrhem testu, což má dopad na reprodukovatelnost.
- Extract-N-Amp kit protocol provides rapid DNA extraction yielding PCR-ready samples in 15 minutes with optimized PCR ReadyMix.
- Zobrazit vše (68)
Další články a protokoly
Jak vám můžeme pomoci
V případě jakýchkoli dotazů odešlete žádost o zákaznickou podporu
nebo se obraťte na náš tým zákaznického servisu:
Pište [email protected]
nebo volejte na +1 (800) 244-1173
Další podpora
- Chromatogram Search
Use the Chromatogram Search to identify unknown compounds in your sample.
- Kalkulačky a aplikace
Web Toolbox - vědecké výzkumné nástroje a zdroje pro analytickou chemii, vědu o živé přírodě, chemickou syntézu a materiálovou vědu.
- Customer Support Request
Zákaznická podpora včetně pomoci s objednávkami, produkty, účty a technickými problémy s webovými stránkami.
- FAQ
Explore our Frequently Asked Questions for answers to commonly asked questions about our products and services.
Abyste mohli pokračovat ve čtení, přihlaste se nebo vytvořte účet.
Nemáte účet?Toto je strojově přeložená stránka.