[Přejít k obsahu](https://www.sigmaaldrich.com#main-content) [](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs) Produkty Nákupní košík0 CZCS Produkty [Přihlášení / Registrovat se](https://www.sigmaaldrich.com/oidc-sign-in) [Dohledání objednávky](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/order-lookup) [Rychlá objednávka](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/quick-order) Nákupní košík0 [Domů](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs)[Aplikace](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/applications)[Genomika](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/applications/genomics)Aplikace polymerázové řetězové reakce # Aplikace polymerázové řetězové reakce (PCR)  Polymerázová řetězová reakce (PCR) je výkonná základní technika molekulární biologie, která je účinnou a rychlou *in vitro* metodou pro enzymatickou amplifikaci specifických sekvencí DNA nebo RNA z různých zdrojů. Standardní PCR se skládá z cílové DNA, sady syntetických oligonukleotidových primerů, které obklopují cílovou sekvenci DNA, termostabilní DNA polymerázy (obvykle Taq polymerázy) a nukleotidů. Při použití termálních cyklérů probíhají během každého amplifikačního cyklu tři fáze, včetně denaturace dvouřetězcové DNA (dsDNA) na samostatnou jednovláknovou DNA, žíhání primerů na cílovou sekvenci DNA a extenze, kdy DNA polymeráza prodlužuje DNA z primerů a vytváří novou dsDNA s jedním starým a jedním novým vláknem. Vlákna syntetizovaná v jednom cyklu slouží jako předloha v dalším cyklu, což vede k milionnásobnému nárůstu množství DNA během pouhých 20 cyklů. * * * ## Související produkty Slide 1 of 9 1 of 2 [ \ Roche \ RNAINH-RO \ Protector RNase Inhibitor](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/roche/rnainhro) Rychlé zobrazení [ \ Sigma-Aldrich \ AMPD1 \ DNase I](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/sigma/ampd1) Rychlé zobrazení [ \ Sigma-Aldrich \ RDRT \ ReadyScript® cDNA Synthesis Mix](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/sigma/rdrt) Rychlé zobrazení [ \ Sigma-Aldrich \ STR1 \ Enhanced Avian First Strand Synthesis Kit](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/sigma/str1) Rychlé zobrazení [ \ Roche \ FSUPMMRO \ FastStart Universal Probe Master (Rox)](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/roche/fsupmmro) Rychlé zobrazení [ \ Roche \ FSUSGMMRO \ FastStart Universal SYBR Green Master (Rox)](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/roche/fsusgmmro) Rychlé zobrazení [ \ Roche \ FSSGMMRO \ FastStart SYBR Green Master](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/roche/fssgmmro) Rychlé zobrazení [ \ Roche \ FSTMPMMRO \ FastStart TaqMan® Probe Master](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/roche/fstmpmmro) Rychlé zobrazení [ \ Roche \ EAGLETMMRO \ EagleTaq Universal Master Mix (ROX)](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/product/roche/eagletmmro) Rychlé zobrazení * * * ## Doporučené kategorie [](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/products/molecular-biology-and-functional-genomics/cloning-and-expression/molecular-cloning-and-protein-expression) [Molekulární klonování a exprese proteinů](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/products/molecular-biology-and-functional-genomics/cloning-and-expression/molecular-cloning-and-protein-expression) Molekulární klonování a metody exprese proteinů a protokoly pro spolehlivé klonování a robustní expresi proteinů z hmyzích, bakteriálních a savčích expresních vektorů. [Obchod s produkty](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/products/molecular-biology-and-functional-genomics/cloning-and-expression/molecular-cloning-and-protein-expression) [](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/products/molecular-biology-and-functional-genomics/epigenetics) [Epigenetika](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/products/molecular-biology-and-functional-genomics/epigenetics) Epigenetická činidla a zdroje pro zkoumání druhů RNA, metylace DNA, modifikací chromatinu a histonů. [Obchod s produkty](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/products/molecular-biology-and-functional-genomics/epigenetics) [](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/products/molecular-biology-and-functional-genomics/microbiome) [Mikrobiom](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/products/molecular-biology-and-functional-genomics/microbiome) Komplexní analýza střevního mikrobiomu: Odhalte komplexní řešení zahrnující přípravu vzorků, sekvenování, bioinformatiku a statistiku. Od 16S po WGS. [Obchod s produkty](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/products/molecular-biology-and-functional-genomics/microbiome) * * * Přehled Související články a protokoly Podpora ## Reverzní transkriptázová PCR (RT-PCR) RT-PCR neboli reverzní transkriptázová PCR je varianta standardní techniky PCR, která zahrnuje amplifikaci specifické mRNA získané z velmi malých vzorků. Eliminuje potřebu zdlouhavého procesu čištění mRNA, který je vyžadován u běžných technik klonování. Při RT-PCR se kromě standardních činidel pro PCR používá reverzní transkriptáza a vzorek RNA. Reakční směs se zahřeje na 37 ˚C, což umožní vytvoření komplementární kopie cDNA ze vzorku RNA pomocí reverzní transkriptázy. Tato cDNA se pak annealizuje na jeden z primerů, což vede k syntéze prvního vlákna. Poté následuje standardní PCR, při níž se nakonec vytvoří dsDNA. RT-PCR se často kombinuje s PCR v reálném čase (qPCR), která se hojně využívá ke kvantifikaci hladin transkriptů v buňkách a tkáních. ## Hot Start PCR Hot Start PCR je technologie, která inhibuje horký start Taq polymerázy nebo inkorporaci modifikovaných dNTP během nastavení reakce, dokud nedojde ke kroku tepelné aktivace. K zastavení aktivity polymerázy s horkým startem jsou k dispozici různé metody, mezi něž patří chemická modifikace, metody zprostředkované protilátkami a metody zprostředkované aptamerem.  ## Endpoint PCR pro dlouhou a přesnou amplifikaci cílů Endpoint PCR se často používá ke zjištění přítomnosti cílů a jejich relativního množství po dokončení reakce. Omezená délka sekvencí vznikajících při standardní PCR, přibližně 5 kb, je částečně překonána začleněním dalších faktorů, které zajišťují "proofreading" aktivitu. Dlouhá a přesná (LA) PCR zahrnuje použití druhé termostabilní polymerázy s 3′→5′ exonukleázou k opravě terminálních chybných nukleotidů, což vede k výrazně zvýšené věrnosti a schopnosti amplifikovat cíle DNA o délce až 40 kb. [](https://www.sigmaaldrich.com/documents-search) [Hledáte konkrétnější informace?](https://www.sigmaaldrich.com/documents-search) Vyhledejte v našem vyhledávači dokumentů datové listy, certifikáty a technickou dokumentaci. [Vyhledat dokumenty](https://www.sigmaaldrich.com/documents-search) ## Související články - [Řešení problémů s amplifikací PCR a RT-PCR](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/technical-documents/technical-article/genomics/pcr/troubleshooting-pcr-and-rt-pcr-amplification) Problémy s PCR a RT-PCR jsou identifikovány během analýzy gelovou elektroforézou, jako je absence pásů, přítomnost nespecifických zákazů, nadměrné rozmazání a rozmazání pásů. - [Digital PCR](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/en/technical-documents/protocol/genomics/pcr/digital-pcr) Digital PCR enables absolute quantification and detection of minority sequences against similar majority sequences, such as somatic mutations. - [Bromid ethylnatý](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/technical-documents/technical-article/genomics/nucleic-acid-labeling-and-detection/ethidium-bromide) Ethidium bromid je dobře známé a široce používané fluorescenční barvivo v biotechnologickém výzkumu. - [Polymerázová řetězová reakce](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/technical-documents/technical-article/genomics/pcr/polymerase-chain-reaction) Polymerázová řetězová reakce je jednou z nejpoužívanějších technik v molekulární biologii. Proces PCR se skládá ze tří hlavních kroků: denaturace, žíhání a extenze. - [Hot Start PCR](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/en/technical-documents/technical-article/genomics/pcr/hot-start-pcr) The purpose of Hot Start PCR is to inhibit the PCR reaction in order to reduce nonspecific amplification, prevent the formation of primer dimers, and increase product yields. - [Zobrazit vše (82)](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/search/facet-search?focus=sitecontent&term=facet-search) ## Související protokoly - [Standardní protokol PCR](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/technical-documents/protocol/genomics/pcr/standard-pcr) Naučte se standardní kroky protokolu PCR a zkontrolujte seznamy činidel nebo parametry cyklování. Tato metoda pro rutinní amplifikaci DNA pomocí PCR používá standardní Taq DNA polymerázu. - [Protokol žíhání oligonukleotidů](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/technical-documents/protocol/genomics/pcr/annealing-oligos) Žíhání je proces zahřívání a ochlazování dvou jednořetězcových oligonukleotidů s komplementárními sekvencemi. - [Teplota tání oligonukleotidů](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/technical-documents/protocol/genomics/pcr/oligos-melting-temp) Seznamte se s metodami výpočtu teploty tání oligonukleotidů (Tm). - [Návrh testu PCR/qPCR/dPCR](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/technical-documents/protocol/genomics/pcr/pcr-qpcr-dpcr-assay-design) Variabilita pracovního postupu PCR je ovlivněna zdrojem vzorku, reverzní transkripcí a návrhem testu, což má dopad na reprodukovatelnost. - [REDExtract-N-Amp™ Tissue PCR Kit Protocol](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/en/technical-documents/protocol/genomics/pcr/redextract-n-amp) Extract-N-Amp kit protocol provides rapid DNA extraction yielding PCR-ready samples in 15 minutes with optimized PCR ReadyMix. - [Zobrazit vše (68)](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/search/facet-search?focus=sitecontent&term=facet-search) ### Další články a protokoly Zadejte klíčová slova Vyhledávání ## Jak vám můžeme pomoci V případě jakýchkoli dotazů odešlete [žádost o zákaznickou podporu](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/support/customer-support) nebo se obraťte na náš tým zákaznického servisu: Pište [custserv@sial.com](mailto:custserv@sial.com) nebo volejte na +1 (800) 244-1173 ## Další podpora - [Chromatogram Search](https://www.sigmaaldrich.com/chromatogram-search) Use the Chromatogram Search to identify unknown compounds in your sample. - [Kalkulačky a aplikace](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/support/calculators-and-apps) Web Toolbox - vědecké výzkumné nástroje a zdroje pro analytickou chemii, vědu o živé přírodě, chemickou syntézu a materiálovou vědu. - [Customer Support Request](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/support/customer-support) Zákaznická podpora včetně pomoci s objednávkami, produkty, účty a technickými problémy s webovými stránkami. - [FAQ](https://maestro.my.site.com/knowledgeportal/s/) Explore our Frequently Asked Questions for answers to commonly asked questions about our products and services. * * * __Doporučené články__ [Řešení problémů s amplifikací PCR a RT-PCR](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/technical-documents/technical-article/genomics/pcr/troubleshooting-pcr-and-rt-pcr-amplification) Problémy s PCR a RT-PCR jsou identifikovány během analýzy gelovou elektroforézou, jako je absence pásů, přítomnost nespecifických zákazů, nadměrné rozmazání a rozmazání pásů. [Digital PCR](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/en/technical-documents/protocol/genomics/pcr/digital-pcr) Digital PCR enables absolute quantification and detection of minority sequences against similar majority sequences, such as somatic mutations. [Bromid ethylnatý](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/technical-documents/technical-article/genomics/nucleic-acid-labeling-and-detection/ethidium-bromide) Ethidium bromid je dobře známé a široce používané fluorescenční barvivo v biotechnologickém výzkumu. [Polymerázová řetězová reakce](https://www.sigmaaldrich.com/CZ/cs/technical-documents/technical-article/genomics/pcr/polymerase-chain-reaction) Polymerázová řetězová reakce je jednou z nejpoužívanějších technik v molekulární biologii. Proces PCR se skládá ze tří hlavních kroků: denaturace, žíhání a extenze. Nejvyšší __Chcete-li pokračovat, musíte se přihlásit.__ Abyste mohli pokračovat ve čtení, přihlaste se nebo vytvořte účet. Přihlásit__Nemáte účet?__Registrovat Toto je strojově přeložená stránka. An unknown error has occured. - Czech - CS - English - EN [Zjistit více](https://www.sigmaaldrich.com)