qPCR
Kvantitativní PCR v reálném čase (qPCR) využívá fluorescenční reportérové molekuly, které umožňují kvantifikaci amplifikovaných produktů. Stejně jako při konvenční PCR se amplifikuje templát DNA, cDNA nebo RNA, ale v každém cyklu se sledují fluorescenční signály pro relativní nebo absolutní kvantifikaci.
Tato technika je užitečná pro řadu oblastí výzkumu, včetně analýzy genové exprese, genotypování, analýzy mikroRNA, analýzy genetických variací a analýzy proteinů.
Doporučené kategorie
Polymerázová řetězová reakce (PCR) je základem molekulárně biologických laboratoří. PCR se používá k amplifikaci DNA o několik řádů a naše činidla a zdroje jsou vhodné pro řadu výzkumných pracovních postupů včetně analýzy genové exprese, genotypování, sekvenování a aplikací mutageneze.
Molekulární klonování a metody exprese proteinů a protokoly pro spolehlivé klonování a robustní expresi proteinů z hmyzích, bakteriálních a savčích expresních vektorů.
Epigenetická činidla a zdroje pro zkoumání druhů RNA, metylace DNA, modifikací chromatinu a histonů.
Komplexní analýza střevního mikrobiomu: Odhalte komplexní řešení zahrnující přípravu vzorků, sekvenování, bioinformatiku a statistiku. Od 16S po WGS.
Jak analyzovat qPCR data
Měří se a kvantifikuje fluorescence reportérových molekul; obvykle se jedná buď o barviva (tj.SYBR® Green, Ethidium Bromide), která interkalují mezi báze ve dvouřetězcové DNA, nebo sondy navržené tak, aby vázaly specifickou sekvenci (tj.Molecular Beacons, TaqMan® probes) na DNA.
Relativní kvantifikace qPCR dat
Existují dvě hlavní metody kvantifikace qPCR dat. Relativní kvantifikace, která je běžnější metodou, využívá informace ΔΔCt, pomocí níž se stanoví poměr exprese nebo množství cílového genu ve vzorku, porovná se s kontrolním genem a normalizuje se s poměrem exprese referenčního genu. Protože se hodnoty účinnosti E pro cílové a referenční geny liší, zohledňuje tato metoda také rozdíly v hodnotách E. Tato metoda se častěji používá při analýze genové exprese.
Absolutní kvantifikace qPCR dat
Druhá metoda, absolutní kvantifikace, je běžnější v environmentální mikrobiologii a využívá standardní křivku (SC). Metoda SC využívá ředicí řady známé koncentrace templátu, N0, k vytvoření standardní křivky pomocí lineární regrese log(N0) versus CT (prahový cyklus). Ta se pak použije k výpočtu koncentrace templátu ve vzorku. Základem této metody je, že hodnota účinnosti vzorku je stejná jako hodnota účinnosti standardu.
Hledáte konkrétnější informace?
Vyhledejte v našem vyhledávači dokumentů datové listy, certifikáty a technickou dokumentaci.
Související články
- Po dokončení tradiční PCR se analýza dat PCR/qPCR provádí rozlišením přes agarózový gel nebo nověji přes kapiláru.
- Polymerázová řetězová reakce v reálném čase umožňuje výzkumníkům odhadnout množství výchozího materiálu ve vzorku. Má mnohem širší dynamický rozsah analýzy než konvenční PCR.
- Průvodce testem PCR vás provede validací primerů a dalšími faktory optimalizace testu, aby byla zajištěna vysoká citlivost a specifičnost pro optimální kvantifikaci DNA/ RNA.
- Variabilita pracovního postupu PCR je ovlivněna zdrojem vzorku, reverzní transkripcí a návrhem testu, což má dopad na reprodukovatelnost.
- The purpose of Hot Start PCR is to inhibit the PCR reaction in order to reduce nonspecific amplification, prevent the formation of primer dimers, and increase product yields.
- Zobrazit vše (50)
Související protokoly
- Náš protokol SYBR Green qPCR je metoda určená k přesné kvantifikaci genové exprese a reakcí RT-PCR.
- Chromatin Immunoprecipitation qPCR for studying gene regulation across conditions.
- Primer Concentration Optimization Protocol creates reaction matrix for testing primer concentrations against various partners.
- Optimalizace podmínek qPCR je důležitá pro vývoj robustního testu. Dva hlavní přístupy jsou optimalizace koncentrace primerů a/nebo teploty žíhání.
- Multiplex qPCR employing probe-based chemistries is a demanding application that often requires extensive optimization and validation.
- Zobrazit vše (34)
Další články a protokoly
Jak vám můžeme pomoci
V případě jakýchkoli dotazů odešlete žádost o zákaznickou podporu
nebo se obraťte na náš tým zákaznického servisu:
Pište custserv@sial.com
nebo volejte na +1 (800) 244-1173
Další podpora
- Kalkulačky a aplikace
Web Toolbox - vědecké výzkumné nástroje a zdroje pro analytickou chemii, vědu o živé přírodě, chemickou syntézu a materiálovou vědu.
- Customer Support Request
Zákaznická podpora včetně pomoci s objednávkami, produkty, účty a technickými problémy s webovými stránkami.
- FAQ
Explore our Frequently Asked Questions for answers to commonly asked questions about our products and services.
Abyste mohli pokračovat ve čtení, přihlaste se nebo vytvořte účet.
Nemáte účet?