Klonování a exprese
Exprese rekombinantních proteinů v savčích buňkách
Technologie klonování a genové exprese využívají výzkumníci v různých oborech ke zkoumání široké škály biologických otázek, včetně pochopení funkce genů, analýzy molekulárních drah, embryonálního vývoje, výzkumu nemocí a bioprocesingu biologických a terapeutických přípravků. Jakmile je gen nebo genetická sekvence identifikována, musí výzkumníci zvolit nejlepší strategii molekulárního klonování a systém exprese proteinů na bázi buněk na základě konkrétní potřeby aplikace. Další informace o expresi genů pomocí technologie CRISPR nebo o umlčování genů pomocí činidel RNAi naleznete na stránku o genové expresi a umlčování genů.
Doporučené kategorie
Naše rozsáhlé portfolio vysoce čistých biologických pufrů v různých formách složení a balení zajišťuje vynikající stabilitu roztoku a kontrolu pH v celém pracovním postupu bioprocesu.
Nabízíme širokou škálu agarosových produktů s různou silou gelu, teplotou tání, teplotou želírování a úrovní elektroendosmózy (EEO), které podpoří vaše výzkumné aplikace.
Vektory pro expresi proteinů
Plasmidy neboli vektory pro expresi proteinů jsou kruhové kousky DNA, které obsahují řadu funkčních prvků pro klonování a expresi proteinu, který vás zajímá. Výběr vhodného expresního vektoru je částečně určen typem proteinu, organismem, který bude protein exprimovat, a konkrétní aplikací a vědeckými otázkami, které chce výzkumník řešit. Široká škála dostupných expresních vektorů umožňuje výzkumníkům vybrat si, které prvky pro klonování, výběr klonů a expresi proteinu jsou pro jejich studii nejvhodnější. Jakmile je vybrána sekvence genu, která je předmětem zájmu, a expresní vektor, výzkumní pracovníci běžně používají nukleázy k přesnému řezání vektoru na specifických místech, aby umožnili klonování genetické sekvence, která je předmětem zájmu, in-frame a nakonec její expresi v hostitelském organismu. Důležité je, že výzkumníci běžně používají chemicky kompetentní buňky a bakteriální transformaci k hostitelství plazmidů rekombinantní DNA, protože jsou stabilní při skladování ve zmrazeném stavu při teplotě -70 °C.
Jak transfekovat buňky
Buněčná transfekce označuje proces vnášení DNA nebo RNA nebo proteinů do eukaryotických buněk. K provedení této části pracovního postupu exprese proteinů mají výzkumníci k dispozici řadu fyzikálních, chemických a biologických technologií. Výzkumníci běžně používají fyzikální metody, jako je elektroporace, nebo chemické metody, včetně fosforečnanu vápenatého (CaPi), polyethyleniminu (PEI) a lipofekčních činidel. Vědci mají k dispozici také virové transdukční systémy, včetně lentivirových, onkoretrovirálních a adenovirových. Použití virových přenosových metod však často vyžaduje dodatečnou izolaci a monitorování z důvodu biologické bezpečnosti.
Systémy pro expresi proteinů
Výzkumníci používají k expresi proteinů svého zájmu různé organismy. Výzkumníci běžně používají bakterie, protože účinně přijímají expresní vektory, mají rychlou dobu zdvojení a za optimálních podmínek mohou produkovat velké množství rekombinantního proteinu. Jelikož jsou však bakterie prokaryotické organismy, nejsou schopny zajistit posttranslační modifikace proteinů, které některé proteiny vyžadují. Eukaryotické buňky, včetně kvasinek a savčích buněčných linií, umožňují posttranslační modifikaci (modifikace) bílkovin a jsou také běžně používány výzkumníky. Výběr nejlepší buněčné linie pro expresi rekombinantních proteinů a strategie exprese proteinů do značné míry závisí na konkrétních potřebách aplikace a otázkách, které chce vědec řešit.
Vyhledejte v našem vyhledávači dokumentů datové listy, certifikáty a technickou dokumentaci.
Související články
- Termín "restrikční enzym" pochází ze studií fága λ (lambda fág) Enterobacteria v laboratořích Wernera Arbera a Matthewa Meselsona.
- Tento klonovací protokol zahrnuje výběr klonovacího systému a plazmidového vektoru, restrikční štěpení plazmidu, restrikční štěpení fragmentů, excizi z gelu, defosforylaci DNA a další.
- Transfekcí se do buněk zavádí genetický materiál, což napomáhá výzkumu v oblasti genové exprese a buněčné biologie.
- The 3xFLAG system enhances fusion protein detection, offering improved sensitivity over traditional methods.
- For best results, ligation reactions must be heat inactivated at 70º C for 15 minutes before transformation. Alternately, the reactions may be purified.
- Zobrazit vše (31)
Související protokoly
- Kolekce restrikčních enzymů byla optimalizována pro trávení pomocí pěti jedinečných pufrů.
- This page describes the characteristics of pGEX expression vectors used with Cytiva products.
- Cloning process, joining linear DNA into a vector, is crucial for biotechnological experiments, enabling DNA fragment recombinant technology.
- Technický článek o kompetentních buňkách. Transformace je proces, při kterém některé bakterie přijímají cizí genetický materiál (holou DNA) z prostředí.
- Dephosphorylation of DNA using Calf Intestinal Alkaline Phosphatase, Shrimp Alkaline Phospha, Bovine Intestinal Alkaline Phosphatase
- Zobrazit vše (42)
Další články a protokoly
Jak vám můžeme pomoci
V případě jakýchkoli dotazů odešlete žádost o zákaznickou podporu
nebo se obraťte na náš tým zákaznického servisu:
Pište [email protected]
nebo volejte na +1 (800) 244-1173
Další podpora
- Kalkulačky a aplikace
Web Toolbox - vědecké výzkumné nástroje a zdroje pro analytickou chemii, vědu o živé přírodě, chemickou syntézu a materiálovou vědu.
- Customer Support Request
Zákaznická podpora včetně pomoci s objednávkami, produkty, účty a technickými problémy s webovými stránkami.
- FAQ
Explore our Frequently Asked Questions for answers to commonly asked questions about our products and services.
Abyste mohli pokračovat ve čtení, přihlaste se nebo vytvořte účet.
Nemáte účet?