P8415

Perossidasi

Type XII, essentially salt-free, lyophilized powder, ≥250 units/mg solid (using pyrogallol)

• Sinonimo/i: Donatore: idrogeno-perossido ossidoreduttasi, Perossidasi di rafano
• Numero CAS: 9003-99-0
• Classificazione EC (Enzyme Commission): 1.11.1.7 (BRENDA, IUBMB)
• Numero CE: 232-668-6
• Numero MDL: MFCD00071339
• Codice UNSPSC: 12352204
• NACRES: NA.54

Proprietà

• Tipo: Type XII
• Forma fisica: essentially salt-free, lyophilized powder
• Attività specifica: ≥250 units/mg solid (using pyrogallol)
• PM: ~44 kDa
• Solubilità: 0.1 M phosphate buffer: soluble (pH 6.0); H₂O: soluble
• Rapporto di assorbanza: RZ ≥3.0
• Temperatura di conservazione: 2-8°C
• InChI: 1S/H2O3/c1-3-2/h1-2H; JSPLKZUTYZBBKA-UHFFFAOYSA-N

Descrizione

Descrizione generale

La perossidasi di rafano si isola dalle radici del rafano (Amoracia rusticana) e appartiene al gruppo delle perossidasi con ferroprotoporfirina. L′HRP è un polipeptide a singola catena che contiene quattro ponti disolfuro. È una glicoproteina che contiene il 18% di carboidrati. La composizione dei carboidrati include galattosio, arabinosio, xilosio, fucosio, mannosio, mannosamina e galattosamina, a seconda del singolo isozima. Il peso molecolare (circa 44 kDa) include la catena polipeptidica (33.890 Dalton), la emina con Ca²⁺ (circa 700 Dalton) e il carboidrato (circa 9.400 Dalton). Esistono almeno sette isoenzimi di HRP. Il punto isoelettrico degli isoenzimi della perossidasi di rafano è compreso fra 3,0 e 9,0.

HRP is a single chain polypeptide containing four disulfide bridges. It is a glycoprotein containing 18% carbohydrate. The carbohydrate composition consists of galactose, arabinose, xylose, fucose, mannose, mannosamine, and galactosamine depending upon the specific isozyme. Its molecular weight (~44 kDa) includes the polypeptide chain (33,890 Daltons), hemin plus Ca²⁺ (~700 Daltons), and carbohydrate (~9,400 Daltons). At least seven isozymes of HRP exist. The isoelectric point for horseradish peroxidase isozymes ranges from 3.0 - 9.0.

Applicazioni

Horseradish peroxidase (HRP) is isolated from horseradish roots (Amoracia rusticana) and belongs to the ferroprotoporphyrin group of peroxidases. It is used in biochemistry applications such as western blots, ELISA and Immunohistochemistry. Horseradish peroxidase is used to amplify a weak signal and increase detectability of a target molecule, such as a protein. Product P8415, type XII, is an essentially salt free lyophilized powder. It is a further purification of product P8375. It is commonly used to determine amounts of glucose and peroxides in solution. It has been used in an aspergillus fumigatus rapid susceptibility assay.

Peroxidase from horseradish has been used to initiate peroxidase-coupled assay. It has also been used in the preparation of β-galactosidase (β-gal) stock solution.

The enzyme has been used to determine H₂O₂ production in tobacco BY-2 cells using a spectrofluorimetric method.

Azioni biochim/fisiol

HRP readily combines with hydrogen peroxide (H₂O₂) and the resultant [HRP-H₂O₂] complex can oxidize a wide variety of hydrogen donors. The optimal pH is 6.0-6.5 and the enzyme is most stable in the pH range of 5.0-9.0. HRP can be conjugated to antibodies by several different methods including glutaraldehyde, periodate oxidation, through disulfide bonds, and also via amino and thiol directed cross-linkers. It is smaller and more stable than the enzyme labels β-galactosidase and alkaline phosphatase and hence, it is the most desired label. Also, its glycosylation leads to lower non-specific binding. It is also used for the determination of glucose and peroxides in solution.

When incubated with a substrate, horseradish peroxidase produces a coloured, fluorimetric, or luminescent derivative of the labeled molecule, allowing quantification. Horseradish peroxidase has been shown to slightly reduce the level of inhibition in a cydAB mutant. Known inhibitors are sodium azide, cyanide, L-cystine, dichromate, ethylenethiourea, hydroxylamine, sulfide, vanadate, p-aminobenzoic acid, and Cd²⁺, Co²⁺, Cu²⁺, Fe³⁺, Mn²⁺, Ni²⁺, and Pb²⁺ ions.

Altre note

A further purification of Peroxidase TypeVI (P8375).

Per maggiori informazioni sulla perossidasi visitare la pagina www.sigma-aldrich.com/enzymeexplorer.

Definizione di unità

Una unità di pirogallolo forma 1,0 mg di purpurogallina da pirogallolo in 20 secondi a pH 6,0 e 20 °C.

Nota sulla preparazione

Chromatographically purified

Risultati analitici

Il RZ (Reinheitszahl) è il rapporto di assorbanza A₄₀₃/A₂₇₅ determinato a 0,5-1,0 mg/mL in acqua deionizzata. Misura il contenuto di emina, non l′attività enzimatica. Anche preparazioni con un RZ elevato possono avere una bassa attività enzimatica.

Preliminary isoelectric focusing data indicates this is primarily isoenzyme C

Informazioni sulla sicurezza

• Pittogrammi: GHS08
• Avvertenze: Danger
• Indicazioni di pericolo: H334
• Consigli di prudenza: P261 - P284 - P501
• Classi di pericolo: Resp. Sens. 1
• Codice della classe di stoccaggio: 11 - Combustible Solids
• Classe di pericolosità dell'acqua (WGK): WGK 1
• Dispositivi di protezione individuale: Eyeshields, Gloves, type N95 (US)