P6782

Peroxidase

Type VI-A, essentially salt-free, lyophilized powder, ≥250 units/mg solid (using pyrogallol), 950-2000 units/mg solid (using ABTS)

• Sinônimo(s): Doador:peróxido de hidrogênio oxidorredutase, Peroxidase de raiz forte
• Número CAS: 9003-99-0
• Número da licença da enzima: 1.11.1.7 (BRENDA, IUBMB)
• Número CE: 232-668-6
• Número MDL: MFCD00071339
• Código UNSPSC: 12352204
• eCl@ss: 32160410
• NACRES: NA.54

Propriedades

• tipo: Type VI-A
• forma: essentially salt-free, lyophilized powder
• atividade específica: ≥250 units/mg solid (using pyrogallol); 950-2000 units/mg solid (using ABTS)
• peso molecular: ~44 kDa
• solubilidade: 0.1 M phosphate buffer: soluble 10 mg/mL, clear, orange to red (pH 6.0); H₂O: soluble
• aplicação(ões): diagnostic assay manufacturing
• temperatura de armazenamento: 2-8°C
• InChI: 1S/H2O3/c1-3-2/h1-2H
• chave InChI: JSPLKZUTYZBBKA-UHFFFAOYSA-N

Descrição

Descrição geral

A peroxidase de raiz forte é isolada da raiz de Amoracia rusticana e pertence ao grupo ferroprotoporfirínico de peroxidases. A HRP é um polipeptídeo de cadeia simples com quatro pontes dissulfeto. É uma glicoproteína que contém 18% de carboidratos. A composição de carboidratos consiste em galactose, arabinose, xilose, fucose, manose, manosamina e galactosamina, dependendo da isoenzima específica. O peso molecular (~44 kDa) inclui a cadeia polipeptídica (33.890 Daltons), hemina mais Ca²⁺ (~700 Daltons) e carboidratos (~9.400 Daltons). Existem no mínimo sete isoenzimas de HRP. O ponto isoelétrico das isoenzimas de peroxidase de raiz forte varia entre 3,0 e 9,0.

Aplicação

A enzima da Sigma foi usada no desenvolvimento do biossensor de galactose oxidase-peroxidase rápido e sensível para a detecção de galactose com estabilidade prolongada. Ela foi usada como um componente de uma placa de meio (ágar MRS) contendo 3,3′,5,5′-tetrametilbenzidina (TMB) para o crescimento de Lactobacillus sp. A TMB atua como um substrato cromogênico da peroxidase. A peroxidase gera O₂ de H₂O₂ produzido pelo lactobacilos, e a TMB cora as colônias de azul na presença de O₂. Assim, após 48 horas de incubação em CO₂ a 5% no ar, as colônias que produzem H₂O₂ no ágar MRS exibem cor azul escuro. As que não produzem H₂O₂ são incolores. Ela foi usada para estudar o efeito de estabilização do álcool polivinílico sobre a peroxidase de rábano. Também é usada para a determinação de glicose e peróxidos em solução.

A peroxidase de rábano (HRP) é isolada das raízes do rábano (Amoracia rusticana). Ela é usada em aplicações bioquímicas, como western blot, ELISA e imuno-histoquímica. A peroxidase de rábano é usada para amplificar um sinal fraco e aumentar a detectabilidade de uma molécula-alvo, como uma proteína. O produto P6782 é do tipo VI-A e é essencialmente um pó liofilizado sem sal. É usada para quantificar colesterol e ésteres de colesterol e para estudar o depósito de lipídeos in vitro sobre lentes de contato de hidrogel e hidrogel de silicone.

Ações bioquímicas/fisiológicas

A HRP se combina facilmente com peróxido de hidrogênio (H₂O₂), e o complexo [HRP-H₂O₂] resultante pode oxidar uma grande variedade de doadores de hidrogênio. O pH ótimo é 6,0-6,5, e a enzima é mais estável na faixa de pH de 5,0-9,0. A HRP pode ser conjugada a anticorpos por vários métodos diferentes, que incluem o uso de glutaraldeído, oxidação com periodato, por meio de ligações dissulfeto e por reticulantes direcionados a amino e tiol. É menor e mais estável que os marcadores enzimáticos, β-galactosidase e fosfatase alcalina. Por isso, é o marcador mais desejado. Além disso, sua glicosilação diminui a formação de ligações inespecíficas. Azida sódica, cianeto, L-cistina, dicromato, etilenotioureia, hidroxilamina, sulfeto, vanadato, ácido p-aminobenzoico, bem como os íons Cd²⁺, Co²⁺, Cu²⁺, Fe³⁺, Mn²⁺, Ni²⁺, e Pb²⁺, inibem a atividade da enzima.

Quando incubada com um substrato, a peroxidase de rábano produz um derivado colorido, fluorimétrico ou luminescente da molécula marcada, o que possibilita a quantificação. Demonstrou-se que a peroxidase de rábano reduz ligeiramente o nível de inibição em um cydAB mutante.

Embalagem

Embalada em mg, sólido

Ligação

Semelhante a P8375

Definição da unidade

Uma unidade ABTS oxidará 1 μmol de ABTS por minuto a 25 °C em pH 5,0

Uma unidade de pirogalol forma 1,0 mg de purpurogalina a partir do pirogalol em 20 segundos em pH 6,0 a 20 °C.

Nota de preparo

As soluções deste produto na concentração de 1 mg/ml em tampão fosfato 0,1 M (pH 6,0) permanecem ativas por pelo menos duas semanas em temperatura ambiente. A solução mantém a atividade após 5 ciclos de congelamento-descongelamento.

Nota de análise

Este produto é testado usando ABTS para fácil comparação com outros fornecedores′ unidade: aproximadamente 1.000 unidades por mg, sólido

RZ (Reinheitszahl) é a taxa de absorbância A₄₀₃/A₂₇₅ determinada a 0,5-1,0 mg/ml em água deionizada. É uma medida do teor de hemina, e não da atividade enzimática. Mesmo preparações com RZ alto podem ter atividade enzimática baixa.

Outras notas

Veja mais informações sobre peroxidase em www.sigma-aldrich.com/enzymeexplorer.

Informações de segurança

• Pictogramas: GHS08
• Palavra indicadora: Danger
• Frases de perigo: H334
• Declarações de precaução: P261 - P284 - P501
• Classificações de perigo: Resp. Sens. 1
• Código de classe de armazenamento: 11 - Combustible Solids
• Classe de risco de água (WGK): WGK 1
• Equipamento de proteção individual: Eyeshields, Gloves, type N95 (US)