P8250

Peroxidase

Type II, essentially salt-free, lyophilized powder, 150-250 units/mg solid (using pyrogallol)

• Sinônimo(s): Doador:peróxido de hidrogênio oxidorredutase, Peroxidase de raiz forte
• Número CAS: 9003-99-0
• Número da licença da enzima: 1.11.1.7 (BRENDA, IUBMB)
• Número CE: 232-668-6
• Número MDL: MFCD00071339
• Código UNSPSC: 12352204
• eCl@ss: 32160410
• NACRES: NA.54

Propriedades

• fonte biológica: horseradish
• Nível de qualidade: 300
• tipo: Type II
• Formulário: essentially salt-free, lyophilized powder
• atividade específica: 150-250 units/mg solid (using pyrogallol)
• peso molecular: ~44 kDa
• solubilidade: 0.1 M phosphate buffer: soluble (pH 6.0); H₂O: soluble
• razão de absorbância: RZ ≥1.8
• aplicação(ões): diagnostic assay manufacturing
• temperatura de armazenamento: 2-8°C
• cadeia de caracteres SMILES: [O+H2]O[O-]
• InChI: 1S/H2O3/c1-3-2/h1-2H
• chave InChI: JSPLKZUTYZBBKA-UHFFFAOYSA-N

Descrição

Descrição geral

A peroxidase de raiz forte é isolada da raiz de Amoracia rusticana e pertence ao grupo ferroprotoporfirínico de peroxidases. A HRP é um polipeptídeo de cadeia simples com quatro pontes dissulfeto. É uma glicoproteína que contém 18% de carboidratos. A composição de carboidratos consiste em galactose, arabinose, xilose, fucose, manose, manosamina e galactosamina, dependendo da isoenzima específica. O peso molecular (~44 kDa) inclui a cadeia polipeptídica (33.890 Daltons), hemina mais Ca²⁺ (~700 Daltons) e carboidratos (~9.400 Daltons). Existem no mínimo sete isoenzimas de HRP. O ponto isoelétrico das isoenzimas de peroxidase de raiz forte varia entre 3,0 e 9,0.

Aplicação

Horseradish peroxidase (HRP) is isolated from horseradish roots (Amoracia rusticana). It is used in biochemistry applications such as western blots, ELISA and Immunohistochemistry. Horseradish peroxidase is used to amplify a weak signal and increase detectability of a target molecule, such as a protein. Horseradish peroxidase, product P8250, has been used to study nonoral antigens in inflamed gingiva and Ebola virus glycoprotein toxicity.

The enzyme has been used as a comparison during the peroxidase assay of extract from mature tall fescue leaf blades. It has also been used to measure H₂O₂ production.

Ações bioquímicas/fisiológicas

HRP readily combines with hydrogen peroxide (H₂O₂) and the resultant [HRP-H₂O₂] complex can oxidize a wide variety of hydrogen donors. The optimal pH is 6.0-6.5 and the enzyme is most stable in the pH range of 5.0-9.0. HRP can be conjugated to antibodies by several different methods including glutaraldehyde, periodate oxidation, through disulfide bonds, and also via amino and thiol directed cross-linkers. It is smaller and more stable than the enzyme labels β-galactosidase and alkaline phosphatase. Hence, it is the most desired label. Also, its glycosylation leads to lower non-specific binding. It is also used for the determination of glucose and peroxides in solution. Sodium azide, cyanide, L-cystine, dichromate, ethylenethiourea, hydroxylamine, sulfide, vanadate, p-aminobenzoic acid, and Cd²⁺, Co²⁺, Cu²⁺, Fe³⁺, Mn²⁺, Ni²⁺, Pb²⁺ ions are found to inhibit the enzyme activity.

When incubated with a substrate, horseradish peroxidase produces a coloured, fluorimetric, or luminescent derivative of the labeled molecule, allowing quantification. Horseradish peroxidase has been shown to slightly reduce the level of inhibition in a cydAB mutant.

Qualidade

Preliminary work shows it to contain at least five isoenzymes.

Definição da unidade

Uma unidade de pirogalol forma 1,0 mg de purpurogalina a partir do pirogalol em 20 segundos em pH 6,0 a 20 °C.

Nota de análise

RZ (Reinheitszahl) é a taxa de absorbância A₄₀₃/A₂₇₅ determinada a 0,5-1,0 mg/ml em água deionizada. É uma medida do teor de hemina, e não da atividade enzimática. Mesmo preparações com RZ alto podem ter atividade enzimática baixa.

Outras notas

Veja mais informações sobre peroxidase em www.sigma-aldrich.com/enzymeexplorer.

Informações de segurança

• Pictogramas: GHS08
• Palavra indicadora: Danger
• Frases de perigo: H334
• Declarações de precaução: P261 - P284 - P501
• Classificações de perigo: Resp. Sens. 1
• Código de classe de armazenamento: 13 - Non Combustible Solids
• Classe de risco de água (WGK): WGK 1
• Equipamento de proteção individual: Eyeshields, Gloves, type N95 (US)