This product is soluble in 0.15 M NaCl at 5 mg/mL. Solutions prepared at 10 mg/mL in 0.15 M NaCl may lose up to 10% activity when stored for 1 week in aliquots at –20 °C. The same solutions stored in aliquots at 2-8 °C can lose up to 20% activity. Please see the link below to review the product datasheet for additional information:
https://www.sigmaaldrich.com/deepweb/assets/sigmaaldrich/product/documents/233/818/dn25pis-ms.pdf
DN25
Desoxirribonuclease I
Deoxyribonuclease I from bovine pancreas
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lyophilized powder, Protein ≥85 %, ≥400 Kunitz units/mg protein
Sinônimo(s):
Desoxirribonuclease, DNase I, Desoxirribounucleato 5′-oligonucleotídeo-hidrolase
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About This Item
Produtos recomendados
fonte biológica
bovine pancreas
Nível de qualidade
Formulário
lyophilized powder
atividade específica
≥400 Kunitz units/mg protein
peso molecular
~31 kDa
composição
Protein, ≥85%
técnica(s)
DNA extraction: suitable
solubilidade
0.15 M NaCl: soluble 5.0 mg/mL, hazy
adequação
suitable for molecular biology
aplicação(ões)
diagnostic assay manufacturing
diagnostic assay manufacturing
atividade externa
RNase ≤0.02%
Condições de expedição
wet ice
temperatura de armazenamento
−20°C
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Categorias relacionadas
Descrição geral
A DNase I, ou desoxirribonuclease I, é uma endonuclease isolada do pâncreas bovino.
- Nossa DNase I digere DNA de fita simples e dupla-fita em oligonucleotídeos e mononucleotídeos.
- A DNase pancreática bovina existe em quatro isoformas enzimáticas, tendo pontos isoelétricos para A, B, C e D: 5,22, 4,96, 5,06 e 4,78.3. A forma predominante é a A, com quantidades menores de B e C, e apenas uma quantidade insignificante de D.
- A estrutura da DNase I é similar à da exonuclease III. Ela contém duas folhas ß centrais. Cada folha β é composta por seis fitas β. Esse complexo de folhas β está cercado por extensas regiões de alça e hélices α. Essa enzima tem estrutura semelhante à da exonuclease III.[1]
Aplicação
- Diminui a viscosidade, proporcionando melhores rendimentos pela remoção de DNA no isolamento de células primárias:
- Incorporação de bases marcadas ao DNA: Corte (“nick”) no DNA
- Marcação radioativa
- Aplicações de bioprocessamento: Remoção de DNA
- Eliminação de DNA genômico de preparados de RNA antes da realização de RT-PCR
- transcrição in vitro
- Tradução de cortes (“nicks”)
- “Footprinting” de DNase
- Regulação da polimerização da actina em células e na apoptose celular
- Reticulação UV de proteínas a ácidos nucleicos
- A DNase desempenha um papel na regulação da polimerização da actina em células e está envolvida no processo de apoptose [1]
Usado para remoção de DNA de amostras proteicas.
Ações bioquímicas/fisiológicas
A Dnase I é uma endonuclease que atua nas ligações de fosfodiéster adjacentes às pirimidinas para produzir polinucleotídeos com terminações 5′-fosfato. Na presença de Mg2+, a DNAse I cliva cada fita de DNA de modo independente, sendo os sítios de clivagem aleatórios. Ambas as fitas de DNA são clivadas aproximadamente no mesmo sítio na presença de Mn2+.[1] Cátions divalentes como Mn2+, Ca2+, Co2+ e Zn2+ são ativadores da enzima. Um concentração 5 mM de Ca2+ estabiliza a enzima contra digestão proteolítica. O pH ideal é de entre 7 e 8.[2] A DNAse I do pâncreas bovino consiste em 4 componentes cromatograficamente distinguíveis, A, B, C e D, com suas razões molares de 4:1:1, respectivamente. Apenas quantidades insignificantes de D são encontradas.[3] Os compostos 2-mercaptoetanol, quelantes, dodecilsulfato de sódio (SDS)[4] e actina[5] são inibidores conhecidos da atividade da enzima.
Características e benefícios
Nossa desoxirribonuclease DNase I é, essencialmente, um produto isento de RNases, o que apoia a aplicação do produto.
Definição da unidade
Uma unidade Kunitz produzirá uma mudança no A260 de 0,001 por minuto por ml em pH 5,0 a 25 °C, usando DNA, tipo 1 ou III, como substrato.
forma física
A preparação bruta contém cloreto de cálcio
Nota de preparo
A solução de 10 mg/ml de DNAse I em 0,15 M de NaCl pode perder <10% de sua atividade quando armazenada por uma semana em alíquotas a −20 °C. As mesmas soluções, quando armazenadas em alíquotas a 2-8 °C, podem perder aproximadamente 20% da sua atividade. Ela permanece ativa por até cinco horas a 60 °C, em pH entre 5 e 7, e perde sua atividade em <10 minutos a 68 °C. Ela perde sua atividade a uma taxa de 6%/hora em tampão de acetato (pH 5,0) e em tampão tris (pH 7,2) com concentração de 1 mg/ml.
Nota de análise
Proteína determinada por biureto.
Inibidor
Nº do produto
Descrição
Preços
Palavra indicadora
Danger
Frases de perigo
Declarações de precaução
Classificações de perigo
Resp. Sens. 1
Código de classe de armazenamento
11 - Combustible Solids
Classe de risco de água (WGK)
WGK 3
Ponto de fulgor (°F)
Not applicable
Ponto de fulgor (°C)
Not applicable
Equipamento de proteção individual
Eyeshields, Gloves, type N95 (US)
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Protocolos
To standardize a procedure for the enzymatic assay of Deoxyribonuclease I.
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HOW CAN I PRESERVE DN25 DILUTED and filtered in culture medium? 4C or -20 C?. It will lose activity?
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What is the recommended method for long-term storage of the 1 gram bottle of DN25 in solution?
1 answer-
The user bulletin provides guidance on the storage of DNase I once reconstituted. When stored in aliquots at -20°C, solutions of DNase I at 10 mg/mL in 0.15 M NaCl may lose 10% of activity over a week, while storing the same solutions at 2–8°C can result in a 20% activity loss. Alternatively, maintaining solutions at a minimum concentration of 1 mg protein/mL with 5 mM calcium chloride at -20°C can retain 90% activity for at least a year. Solutions with 0.1 mg protein/mL are less stable and may need gelatin as a stabilizer.
For applications not affected by glycerol, two storage buffer options are available as they do not freeze at -20°C:
• 20 mM sodium acetate (pH 6.5) with 5 mM CaCl2, 0.1 mM phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF), and 50% (v/v) glycerol, containing DNase I at 5 mg/mL.
• 10 mM Tris-HCl (pH 7.5) with 50 mM NaCl, 10 mM MgCl2, 1 mM DTT, and 50% (v/v) glycerol, with DNase I at 2 mg/mL.Helpful?
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Hi I use the DNase during isolation of cells from lung tissue. Do I need to filter the DNase solution before usage?
1 answer-
This is not a sterile product. If sterility is required due to the specific application, solutions may be filter sterilized before use. Please see the link below to review the product datasheet:
https://www.sigmaaldrich.com/deepweb/assets/sigmaaldrich/product/documents/233/818/dn25pis-ms.pdfHelpful?
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I use the DNase when I isolate lung cells from lung. Do I need to filter them before I use? I will culture the isolated lung cells.
1 answer-
Yes, please filter the DNase solution before use in cell culture, preferably with a 0.22 um filter. The powder is not sterilized as provided.
Helpful?
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