D5025

Desoxirribonuclease I

Type IV, lyophilized powder, ≥2,000 Kunitz units/mg protein

• Sinônimo(s): DNase I, Desoxirribounucleato 5′-oligonucleotídeo-hidrolase
• Número CAS: 9003-98-9
• Número da licença da enzima: 3.1.21.1 (BRENDA, IUBMB)
• Número CE: 232-667-0
• Número MDL: MFCD00130918
• Código UNSPSC: 12352204
• NACRES: NA.54

Propriedades

• fonte biológica: bovine pancreas
• tipo: Type IV
• forma: lyophilized powder
• atividade específica: ≥2,000 Kunitz units/mg protein
• peso molecular: ~31 kDa
• purificado por: chromatography
• composição: Protein, ≥80%
• técnica(s): DNA purification: suitable
• solubilidade: 0.15 M NaCl: soluble 5.0 mg/mL, clear, colorless
• adequação: suitable for molecular biology
• aplicação(ões): diagnostic assay manufacturing; diagnostic assay manufacturing
• atividade externa: Chymotrypsin ≤0.5%; Protease ≤0.05%; RNase ≤0.02%
• Condições de expedição: wet ice
• temperatura de armazenamento: −20°C

Descrição

Aplicação

A DNAse I é usada para fazer cortes no DNA como um primeira etapa para incorporar bases marcadas no DNA. A enzima da Sigma foi usada no processamento de tecido cerebral de rato. Este estudo mostrou que o crescimento axonal em astrócitos não é inibido por oligodendrócitos. Em um outro estudo, amostras fixadas descongeladas de E. coli foram digeridas com DNAse I da Sigma juntamente com outras enzimas. A digestão foi feita antes da permeabilização e coloração dos ácidos nucleicos.

A desoxirribonuclease I de pâncreas bovino foi usada em um estudo para investigar uma análise de zimograma bidimensional de nucleases em Bacillus subtilis. A desoxirribonuclease I de pâncreas bovino também foi usada em um estudo para investigar os efeitos de medicamentos e intercaladores que se ligam às ranhuras maiores e menores sobre a associação ao DNA das proteínas RecA e desoxirribonuclease I que se ligam às ranhuras menores.

Usado para remoção de DNA de amostras proteicas.

Ações bioquímicas/fisiológicas

A Dnase I é uma endonuclease que atua nas ligações de fosfodiéster adjacentes às pirimidinas para produzir polinucleotídeos com terminações 5′-fosfato. Na presença de Mg²⁺, a DNAse I cliva cada fita de DNA de modo independente, sendo os sítios de clivagem aleatórios. Ambas as fitas de DNA são clivadas aproximadamente no mesmo sítio na presença de Mn²⁺. O pH ideal é de entre 7 e 8. Cátions divalentes como Mn²⁺, Ca²⁺, Co²⁺ e Zn²⁺ são ativadores da enzima. Um concentração 5 mM de Ca²⁺ estabiliza a enzima contra digestão proteolítica. A DNAse I do pâncreas bovino consiste em 4 componentes cromatograficamente distinguíveis, A, B, C e D, com suas razões molares de 4:1:1, respectivamente. Apenas quantidades insignificantes de D são encontradas. Os compostos 2-mercaptoetanol, quelantes, dodecilsulfato de sódio (SDS) e actina são inibidores conhecidos da atividade da enzima.

Definição da unidade

Uma unidade Kunitz produz um ΔA₂₆₀ de 0,001 por minuto por ml em pH 5,0 a 25 °C, usando DNA, tipo 1 ou III, como substrato.

forma física

Pó liofilizado contendo cloreto de cálcio

Nota de preparo

A solução de 10 mg/ml de DNAse I em 0,15 M de NaCl pode perder <10% de sua atividade quando armazenada por uma semana em alíquotas a −20 °C. As mesmas soluções, quando armazenadas em alíquotas a 2-8 °C, podem perder aproximadamente 20% da sua atividade. Ela permanece ativa por até cinco horas a 60 °C, em pH entre 5 e 7, e perde sua atividade em <10 minutos a 68 °C. Ela perde sua atividade a uma taxa de 6%/hora em tampão de acetato (pH 5,0) e em tampão tris (pH 7,2) com concentração de 1 mg/ml.

Nota de análise

Proteína determinada por biureto.

Informações de segurança

• Pictogramas: GHS08
• Palavra indicadora: Danger
• Frases de perigo: H334
• Declarações de precaução: P261 - P284 - P501
• Classificações de perigo: Resp. Sens. 1
• Código de classe de armazenamento: 11 - Combustible Solids
• Classe de risco de água (WGK): WGK 3
• Ponto de fulgor (°F): Not applicable
• Ponto de fulgor (°C): Not applicable