D4527

Desoxirribonuclease I

Type II, lyophilized powder, Protein ≥80 %, ≥2,000 units/mg protein

• Sinônimo(s): DNase I, Desoxirribounucleato 5′-oligonucleotídeo-hidrolase
• Número CAS: 9003-98-9
• Número da licença da enzima: 3.1.21.1 (BRENDA, IUBMB)
• Número CE: 232-667-0
• Número MDL: MFCD00130918
• Código UNSPSC: 12352204
• NACRES: NA.54

Propriedades

• fonte biológica: bovine pancreas
• tipo: Type II
• forma: lyophilized powder
• atividade específica: ≥2,000 units/mg protein
• peso molecular: ~31 kDa
• purificado por: chromatography
• composição: Protein, ≥80%
• técnica(s): DNA extraction: suitable
• solubilidade: 0.15 M NaCl: soluble 5.0 mg/mL, clear
• adequação: suitable for molecular biology
• aplicação(ões): diagnostic assay manufacturing; diagnostic assay manufacturing
• atividade externa: Chymotrypsin ≤0.01%; Protease ≤0.005%; RNase ≤0.01%
• Condições de expedição: wet ice
• temperatura de armazenamento: −20°C

Descrição

Aplicação

A DNase I é usada para promover uma falha na sequência de DNA (nick) como a primeira etapa para incorporar bases marcadas ao DNA. A enzima da Sigma foi usada junto com a RNAse no estoque de nuclease durante o preparo do lisado celular de linhagens celulares de rim canino Madin-Darby (MDCK) II. Ela também foi usada durante a extração de RNA do vírus Sindbis.

A desoxirribonuclease I de pâncreas bovino foi usada para identificação, localização e expressão de dois genes humanos novos similares à desoxirribonuclease I. A desoxirribonuclease I de pâncreas bovino também foi usada em um estudo que investigou uma nova abordagem para obter RNase, DNase, colesterol esterase e tripsina de alta atividade derivadas do pâncreas bovino.

Usado para remoção de DNA de amostras proteicas.

Ações bioquímicas/fisiológicas

A DNase I é uma endonuclease que age nas ligações fosfodiéster adjacente às pirimidinas para produzir polinucleotídeos com 5′-fosfatos terminais. Na presença de Mg²⁺, a DNase I cliva cada fita de DNA de forma independente, e os sítios de clivagem são aleatórios. As duas fitas de DNA são clivadas aproximadamente no mesmo sítio na presença de Mn²⁺. O pH ideal é de entre 7 e 8. Cátions divalentes como Mn²⁺, Ca²⁺, Co²⁺ e Zn²⁺ são ativadores da enzima. Uma concentração de Ca²⁺ 5 mM estabiliza a enzima contra digestão proteolítica. A DNase I do pâncreas bovino consiste em quatro componentes diferenciáveis por meio de cromatografia, A, B, C e D, com razões molares de 4:1:1, respectivamente. São encontradas apenas pequenas quantidades de D. 2-Mercaptoetanol, quelantes, dodecil sulfato de sódio (SDS) e actina são inibidores conhecidos da atividade enzimática.

Características e benefícios

Eficaz para a formação de nichos de DNA e remoção de DNA de amostras proteicas

Definição da unidade

Uma unidade de Kunitz produz uma mudança em A₂₆₀ de 0,001 por minuto por ml em pH 5,0 a 25 °C usando DNA, tipo I ou III, como substrato.

forma física

Contém cloreto de cálcio

Nota de preparo

O pó de enzima pode ser reconstituído em água ou qualquer tampão em pH 4,0-9,0, exceto tampão fosfato. Quelantes de cálcio devem ser evitados. A solução de 10 mg/ml de DNase I em NaCl 0,15 M pode perder <10% de sua atividade quando armazenada em alíquotas por uma semana a −20 °C. As mesmas soluções armazenadas em alíquotas a 2-8 °C podem perder cerca de 20% de atividade. Ela continua ativa por até cinco horas a 60 °C entre pH 5 e 7, e perde a atividade em <10 minutos a 68 °C. Ela perde a atividade a uma taxa de 6%/hora em tampão acetato (pH 5,0) e tampão tris (pH 7,2) a uma concentração de 1 mg/ml.

Nota de análise

Proteína determinada por biureto.

Informações de segurança

• Pictogramas: GHS08
• Palavra indicadora: Danger
• Frases de perigo: H334
• Declarações de precaução: P261 - P284 - P501
• Classificações de perigo: Resp. Sens. 1
• Código de classe de armazenamento: 11 - Combustible Solids
• Classe de risco de água (WGK): WGK 3
• Ponto de fulgor (°F): Not applicable
• Ponto de fulgor (°C): Not applicable