DN25

Deoxyribonuclease I aus Rinderpankreas

lyophilized powder, Protein ≥85 %, ≥400 Kunitz units/mg protein

• Synonym(e): Desoxyribonuklease, DNase I, Deoxyribonucleat-5′-oligonucleotido-hydrolase
• CAS-Nummer: 9003-98-9
• EC-Nummer: 3.1.21.1 (BRENDA, IUBMB)
• EG-Nummer: 232-667-0
• MDL-Nummer: MFCD00130918
• UNSPSC-Code: 12352204
• NACRES: NA.54

Eigenschaften

• Biologische Quelle: bovine pancreas
• Form: lyophilized powder
• Spezifische Aktivität: ≥400 Kunitz units/mg protein
• Mol-Gew.: ~31 kDa
• Zusammensetzung: Protein, ≥85%
• Methode(n): DNA extraction: suitable
• Löslichkeit: 0.15 M NaCl: soluble 5.0 mg/mL, hazy
• Eignung: suitable for molecular biology
• Anwendung(en): diagnostic assay manufacturing; diagnostic assay manufacturing
• Fremdaktivität: RNase ≤0.02%
• Versandbedingung: wet ice
• Lagertemp.: −20°C

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

DNase I oder Desoxyribonuklease I, ist eine Endonuklease, die aus Rinderpankreas isoliert wird.

• Unsere DNase I schließt Doppelstrang- und Einzelstrang-DNA zu Oligo- und Mononukleotiden auf.
• Rinderpankreas-DNase existiert als vier Isozyme mit folgenden isoelektrischen Punkten für A, B, C und D: 5,22; 4,96; 5,06 und 4,78.3. Die vorherrschende Form ist A, mit kleineren Anteilen von B und C und nur einer geringen Menge von D.
• Die Struktur von DNase I ähnelt der Struktur von Exonuklease III. Sie umfasst zwei zentrale β-Faltblätter. Jedes β-Faltblatt besteht aus sechs β-Strängen. Dieser Komplex aus β-Faltblättern ist von umfangreichen Schleifen und α-Helixregionen umgeben. Dieses Enzym weist eine strukturelle Ähnlichkeit zu Endonuklease III auf.^[1]

Anwendung

• Verringert die Viskosität und bietet bessere Ausbeuten, indem DNA bei der Primärzellisolation entfernt wird:
• Integrieren von markierten Basen in DNA: DNA-Nick
• Radioaktive Markierung
• Bioprozesstechnik-Anwendungen: DNA-Entfernung
• Entfernen von genomischer DNA aus RNA-Aufbereitungen vor RT-PCR
• In-vitro-Transkription
• Nick-Translation
• DNase-Footprinting
• Aktinregulierung der Aktinpolymerisation in Zellen und Zellapoptose
• UV-Vernetzung von Proteinen mit Nukleinsäuren
• DNase spielt eine Rolle bei der Regulierung der Aktinpolymerisation in Zellen und ist am Apoptoseprozess beteiligt ^[1]

DNA-Entfernung in Proteinproben

Biochem./physiol. Wirkung

DNase I ist eine Endonuklease, die auf Phosphodiesterbindungen neben Pyrimidinen wirkt, um Polynukleotide mit terminalen 5′-Phosphaten zu erzeugen. Bei Anwesenheit von Mg²⁺ spaltet DNase I jeden DNA-Strang unabhängig und an beliebigen Stellen. Beide DNA-Stränge werden in Anwesenheit von Mn²⁺ ungefähr an den gleichen Stellen gespaltet. Zweiwertige Kationen wie Mn²⁺, Ca²⁺, Co²⁺ und Zn²⁺ aktivieren das Enzym. Eine Konzentration von 5 mM Ca²⁺ stabilisiert das Enzym gegen proteolytische Verdauung. Der optimale pH-Wert liegt zwischen 7 und 8. DNase I aus Rinderpankreas besteht aus vier chromatografisch unterscheidbaren Komponenten, A, B, C und D, mit einem Molverhältnis von 4:1:1. Es finden sich nur geringfügige Mengen an D. 2-Mercaptoethanol, Chelatoren, Natriumdodecylsulfat (SDS) und Aktin hemmen bekanntlich die Enzymaktivität.

Leistungsmerkmale und Vorteile

Unsere Desoxyribonuklease DNase I ist ein im Wesentlichen RNase-freies Produkt, das die Produktanwendung unterstützt.

Einheitendefinition

Eine Kunitz-Einheit erzeugt unter Verwendung von DNA Typ I oder III als Substrat eine Veränderung von A₂₆₀ von 0,001 je min und ml bei einem pH-Wert von 5,0 und bei 25 °C.

Physikalische Form

Rohe Zubereitung, enthält Calciumchlorid

Angaben zur Herstellung

10 mg/ml Lösung von DNase I in 0,15 M NaCl können <10 % ihrer Aktivität verlieren, wenn sie eine Woche lang in Aliquoten bei −20 °C aufbewahrt wird. Die gleichen Lösungen können bei Lagerung in Aliquoten bei 2–8 °C etwa 20 % ihrer Aktivität verlieren. Die Lösung bleibt bei 60 °C und einem pH-Wert zwischen 5 und 7 bis zu fünf Stunden aktiv und verliert ihre Aktivität in <10 Minuten bei 68 °C. Sie verliert ihre Aktivität mit einer Rate von 6 %/Stunde in Acetatpuffer (pH-Wert 5,0) und Tris-Puffer (pH-Wert 7,2) bei einer Konzentration von 1 mg/ml.

Hinweis zur Analyse

Proteinbestimmung durch Biuret.

Sicherheitshinweise

• Piktogramme: GHS08
• Signalwort: Danger
• H-Sätze: H334
• P-Sätze: P261 - P284 - P501
• Gefahreneinstufungen: Resp. Sens. 1
• Lagerklassenschlüssel: 11 - Combustible Solids
• WGK: WGK 3
• Flammpunkt (°F): Not applicable
• Flammpunkt (°C): Not applicable
• Persönliche Schutzausrüstung: Eyeshields, Gloves, type N95 (US)