C5138

Collagenase aus Clostridium histolyticum

suitable for release of physiologically active rat hepatocytes, Type IV, 0.5-5.0 FALGPA units/mg solid, ≥125 CDU/mg solid

• Synonym(e): Clostridiopeptidase A
• CAS-Nummer: 9001-12-1
• EC-Nummer: 3.4.24.3 (BRENDA, IUBMB)
• EG-Nummer: 232-582-9
• MDL-Nummer: MFCD00130830
• UNSPSC-Code: 12352204
• NACRES: NA.54

Eigenschaften

• Biologische Quelle: Clostridium histolyticum
• Qualitätsniveau: 200
• Form: powder
• Spezifische Aktivität: ≥125 CDU/mg solid; 0.5-5.0 FALGPA units/mg solid
• Mol-Gew.: 68-130 kDa
• Methode(n): cell culture | mammalian: suitable; single cell analysis: suitable
• Löslichkeit: TESCA buffer (50 mM TES, 0.36 mM Calcium chloride, pH 7.4): soluble 0.05-0.1 mg/mL at 37 °C
• Eignung: suitable for release of physiologically active rat hepatocytes
• Anwendung(en): diagnostic assay manufacturing
• Versandbedingung: wet ice
• Lagertemp.: −20°C

Beschreibung

Anwendung

Kollagenase aus Clostridium histolyticum wird wie folgt verwendet:

• bei der Herstellung einer Kollagenase-Lösung für den Aufschluss von Tumorgewebe[1]
• als Zusatz in phosphatgepufferter Kochsalzlösung für den Aufschluss von exstirpiertem mesenterialem Fettgewebe[2]
• als Zusatz in Roswell Park Memorial Institute-1640 Medium (RPMI-1640) für den Aufschluss von Dickdarmsegmenten[3]
• für den Aufschluss von Endometriumgewebe[4]
• bei der Herstellung von Enzym A und Enzym B für den Aufschluss von entkapselten Hoden[5]

Kollagenase wird bei der Aufbereitung von Arteriengewebe zur Untersuchung von fortgeschrittenen Glykosylierungsendprodukten (AGE) verwendet. Das Enzym wird zusammen mit anderen Proteasen zur Disaggregation von menschlichem Tumorgewebe, Mäusenieren, menschlichem Hirngewebe, Lungenepithelgewebe und vielen anderen Geweben verwendet. Außerdem ist es in Leber- und Nierenperfusionsstudien, beim Pankreasverdau und bei der Isolierung von nicht-parenchymalen Leberzellen wirkungsvoll. Dieses Enzym wurde auf die Freisetzung von Hepatozyten bei einer Konzentration von etwa 1 mg/ml in einem Gesamtvolumen von 100 ml je Rattenleber geprüft.

Geeignet zur Verwendung bei der Herstellung von Einzelzellsuspensionen für die Sequenzierung.

Biochem./physiol. Wirkung

Clostridium histolyticum produziert zwei Klassen von Kollagenasen. Clostridiale Kollagenasen sind effizienter als Säugetierkollagenasen. Es spaltet an einer Vielzahl von Spaltstellen innerhalb der Kollagen-Dreifachhelix. Clostridiale Kollagenasen sind am bakteriellen Befall von Gasbrand beteiligt.[6]

Eine wirkungsvolle Abgabe von Zellen aus dem Gewebe erfordert die Wirkung von Collagenase-Enzymen und der neutralen Protease. Die Kollagenase wird durch vier Grammatom Calcium (Ca²⁺) pro Mol Enzym aktiviert. Es wird angenommen, dass das Kulturfiltrat mindestens 7 verschiedene Proteasen mit einem Molekulargewicht von 68-130 kDa enthält. Der optimale pH-Wert liegt zwischen 6,3 und 8,8. Das Enzym wird üblicherweise zum Abbau von Bindegewebskomponenten in Gewebeproben verwendet, um einzelne Zellen freizusetzen. Die Collagenase-Behandlung kann dazu führen, dass einige Zellen absterben. Üblicherweise werden Konzentrationen zwischen 0,1 mg/ml und 5 mg/ml für den Abbau verwendet. Die Dauer der Reaktion variiert zwischen 15 Minuten und mehreren Stunden und führt zu einer zufriedenstellenden Zelldissoziation, ohne zu viele Zellen absterben zu lassen. Krebs-Ringer-Puffer mit Calcium und BSA wird bevorzugt und Zn²⁺ wird für die Aktivität benötigt.

Collagenase wird durch vier Grammatom Calcium pro Mol Enzym aktiviert. Sie wird durch Ethylenglycol-bis-(beta-aminoethylether)-N, N, N′,N′-tetraessigsäure, β-Mercaptoethanol, Glutathion, Thioglycolsäure und 8-Hydroxychinolin gehemmt.

Vorsicht

Bei Lieferung ist dieses Produkt für die Dauer von einem Jahr bei -20 °C haltbar. Es kommt innerhalb von 30 Tagen bei 37 °C, 50 °C und -20 °C zu keinem Verlust bei der FALGPA- oder Proteaseaktivität. Lösungen von Rohkollagenase sind stabil, wenn sie schnell in Aliquoten (10 mg/ml) eingefroren und bei -20 °C tiefgekühlt gelagert werden. Weitere Gefrier-/Auftauzyklen schädigen die Lösung. Das Produkt behält seine gesamte Aktivität über 7 Stunden, wenn es auf Eis aufbewahrt wird.

Einheitendefinition

Eine Collagen-Aufschlusseinheit (Collagen Digestion Unit, CDU) setzt Peptide aus Rinder-Achillessehnencollagen entsprechend der Ninhydrin-Anfärbung von 1,0 μmol Leucin in 5 Stunden bei pH 7,4 und 37 °C in Gegenwart von Calciumionen frei. Eine FALGPA-Hydrolyseeinheit hydrolysiert 1,0 μmol Furylacryloyl-Leu-Gly-Pro-Ala pro Minute bei 25 °C. Eine neutrale Protease-Einheit hydrolysiert die Caseinmenge, die eine Färbung entsprechend 1,0 μmol Tyrosin pro 5 Stunden bei pH 7,5 und 37 °C produziert. Eine Clostripain-Einheit hydrolysiert 1,0 μmol BAEE pro Minute bei pH 7,6 und 25 °C in Gegenwart von DTT.

Angaben zur Herstellung

Lösungen werden üblicherweise mit 1-2 mg/ml in TESCA-Puffer hergestellt (enthält 50 mM TES, 0,36 mM Calciumchlorid, pH-Wert 7,4 bei 37 °C.
Dieses Produkt enthält zudem Clostripain, neutrale Protease und tryptische Aktivitäten.

Sicherheitshinweise

• Piktogramme: GHS08,GHS07
• Signalwort: Danger
• H-Sätze: H315,H319,H334,H335
• P-Sätze: P261 - P264 - P271 - P280 - P302 + P352 - P305 + P351 + P338
• Gefahreneinstufungen: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
• Zielorgane: Respiratory system
• Lagerklassenschlüssel: 11 - Combustible Solids
• WGK: WGK 1
• Flammpunkt (°F): Not applicable
• Flammpunkt (°C): Not applicable
• Persönliche Schutzausrüstung: dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves