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Merck

二抗

使用 Anti-von Wille 染色的馬肉芽組織(傲慢的肉)。

圖 1.免疫螢光。Equine exuberant granulation (proud flesh) 組織使用 Anti-von Wille 染色。

二抗是與一抗或抗體片段(如 Fc 或 Fab 區域)結合的多克隆或單克隆抗體。它們通常標有探針,使其可用於檢測、純化或分類應用。

我們提供來自各種宿主物種的二抗。我們的多克隆二抗是由小鼠、兔子、山羊和绵羊等宿主動物的血清製成的。而我們的單克隆二抗是由小鼠雜交瘤克隆產生的。

需要幫助為您的應用找到正確的抗體嗎?

使用我們的 Antibody Explorer 搜尋工具 可依類群、應用、物種反應性、結合物、宿主物種和形式來檢視和比較抗體。




有絲分裂蝾螈肺细胞的荧光显微照片。用單株抗體^染色的微管

圖 2.有絲分裂蝾螈肺细胞的荧光显微照片。微管用單株抗體^染色。

Applications of Secondary Antibodies

二抗有許多應用,包括

  • 免疫淨化
  • ELISA
  • Western印圖
  • 免疫組織化學
  • 以細胞為基礎的檢測
  • 流式細胞計
大鼠視神經冷凍切片,用小鼠抗神經絲蛋白 H 及 CF568 山羊抗小鼠染色(神經過程,紅色),兔抗 GFAP 及 CF488A 山羊抗兔染色,高度交叉吸附(膠質細胞,綠色)。細胞核以 RedDot2(青色)染色。

圖 3.免疫細胞化學。大鼠視神經的冷凍切片,用小鼠抗神經絲蛋白 H 和 CF568 山羊抗小鼠染色(神經過程,紅色),兔抗 GFAP 和 CF488A 山羊抗兔染色,高度交叉吸附(膠質細胞,綠色)。細胞核以 RedDot2(青色)染色。

結合抗體與探針

我們提供大量的結合抗體產品組合。結合抗體是一種與標籤連結的單株抗體或多株抗體,用於各種檢測技術中的檢測。第二抗體的特定效用取決於其結合的探針。探針是支援各種檢測技術的分子。接合二抗最常見的檢測系統是比色法或螢光法。

比色法檢測通常以鹼性磷酸酶 (ALP) 或辣根過氧化酶 (HRP) 或其衍生物為基礎。通常使用生物素阿維丁(streptavidin)結合體結合系統來放大 ALP 或 HRP 的比色信號。最常見的螢光檢測利用異硫氰酸螢光素 (FITC)、羅達明或其衍生物、四甲基羅達明異硫氰酸酯 (TRITC)、青氨 (Cy3) 或植物胭脂紅 (R-PE)。

我們提供與各種比色和螢光標籤連結的結合抗體,用於檢測、純化、分類和顯微鏡應用。結合抗體可在多種宿主動物中產生,使其與廣泛的免疫化學試劑相容。對於那些研究需要標記自己試劑的用戶,我們提供抗體標記試劑盒,可將各種標記(生物素、FITC、CF™ 標記)共結到單克隆和多克隆抗體上。

蛋白質 A、G 和 L

蛋白質 A 來自金黃葡萄球菌。蛋白質 G 來自 Streptococcus 物種。這兩種蛋白質都有與哺乳類動物 IgG 的 Fc 部分結合的位點。這些蛋白質對 IgG 的親和力因動物種類而異。蛋白 G 對於大鼠、山羊、绵羊和牛的 IgG,以及小鼠 IgG1 和人類 IgG3 有較高的親和力。蛋白 A 對貓和豚鼠的 IgG 有較高的親和力(表 1)。除了IgG的Fc結合位點,原生蛋白G還包含白蛋白、Igs的Fab區域和膜結合區域的結合位點,這些都可能導致非特異性染色。這些問題已透過製造蛋白質的重組形式來解決。重組蛋白 G 經過工程設計,去除了白蛋白結合區域,重組蛋白 G′ 是一種截短的蛋白質,缺乏白蛋白、Fab 和膜結合位點,但保留了 Fc 結合位點,使其對 IgG 的特異性比原生形式更高。

顯示不同物種對蛋白質 A、蛋白質 G 和蛋白質 L 的結合親和力/能力的表格。

表 1.不同物種的蛋白質 A、G 和 L 結合能力。

蛋白 L 來自 Peptostreptococcus magnus,對各種物種的 kappa 輕鏈 (Table 2)具有親和力。它可以檢測含有 kappa 輕鏈的單克隆或多克隆 IgG、IgA 和 IgM 以及 Fab、F(ab′)2 和重組單鏈 Fv (scFv) 片段。注意:牛、山羊、绵羊和马等物种的 Igs 几乎完全含有 lambda 链,因此它们与蛋白 L 的结合效果不佳。

表格顯示各種 kappa 輕鏈對蛋白質 L 的結合親和力/能力。

表 2.蛋白質 L 與各種免疫球蛋白輕鏈的結合。

檢測試劑

蛋白質 A 和 G 用於結合哺乳類動物組織中的一抗或表面 IgG 的一般、非物種特異性試劑。蛋白質 G 建議用於大多數物種,包括小鼠和大鼠。蛋白 A 建議用於貓和豚鼠。兩者皆不建議用於檢測 IgA 或 IgM、檢測 Fab 片段或檢測禽類 IgG。當蛋白質 A 和蛋白質 G 與瓊脂糖等樹脂結合時,可用於從血清或腹水液中親和純化免疫球蛋白。

蛋白質 L 可作為一般試劑,用於結合哺乳動物或禽類的一級抗體或各類表面 Ig。特別適用於檢測Fab、F(ab′)2片段和重組scFv片段,檢測與Fc受體結合的Igs,或檢測存在牛Igs的單克隆抗體。用途僅限於檢測帶有 kappa 輕鏈的 Igs。

resins

蛋白 A 和蛋白 G 具有與哺乳動物 IgG 的 Fc 部分結合的位點。這些蛋白質對 IgG 的能力因物種而異。一般而言,IgG 對蛋白 G 的親和力比蛋白 A 高,而且蛋白 G 可以結合來自更多不同物種的 IgG。因此,蛋白 A 可用於製備來自某些物種的等型純 IgG。蛋白 L 適合從細胞培養上清液中分離出小鼠單株抗體,而不會受到牛 IgG 的污染。

HeLa cells 用 Mouse-Anti-tubulin 和 CF488A Goat Anti-Mouse 二抗染色(微管,綠色)。肌動蛋白絲用 CF640R 磷脂藍染色(紫色)。細胞核以 DAPI(藍色)對照。

圖 4.CF™ 染料。HeLa cells 用 Mouse-Anti-tubulin 和 CF488A Goat Anti-Mouse 二抗染色(微管,綠色)。肌動蛋白絲用 CF640R phalloidin(紫色)染色。細胞核以 DAPI(藍色)對照。

CF™ 染料標示抗體

CF™ 染料是一系列跨越可見光和近紅外 (near-IR) 光譜的高度水溶性螢光染料,用於標示抗體。由科學家利用突破性的化學技術開發,由於染料設計合理,CF™染料的亮度、光穩定性和顏色選擇可媲美其他商用染料的品質。

我們提供經高度驗證的CF™染料標記二抗,有多種物種可供选择。




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