Western Blotting
Western印跡是一種成熟的蛋白質檢測、分析和定量分析技術。此方法廣泛用於檢測複雜樣品(如組織勻質物和細胞裂解液)中的特定蛋白質分子。Western 印迹法通常是通过凝胶电泳分离蛋白质,然后转移到聚偏二氟乙烯 (PVDF) 或硝酸纤维素膜上。轉移蛋白質後,可將其染色以進行可視化,並透過 N 端排序、質譜分析或免疫檢測直接進行識別。
特色類別
在 Western 印迹免疫檢測中,蛋白質通過與特異性抗體結合來鑒定。通常,一抗與 HRP 或 AP 結合的二抗結合,使用適當的底物進行化學發光或比色檢測。
在生物化學中,Western 印跡被廣泛用於檢測特定蛋白質的存在、確定轉譯後修飾的程度、在克隆應用中驗證蛋白質的表達、分析蛋白質和生物標誌物的表達水平、製作抗體表位圖,以及檢測臨床環境中的疾病標誌物。
在有限的樣本中同時分析更多蛋白質的需求,推動了印圖技術靈敏度和速度的持續研究。雙重印跡可消除非特異性互作所造成的假陽性。遠西印圖可檢測特定蛋白質與蛋白質之間的相互作用。西南印圖可用於鑑定與特定 DNA 序列互作的蛋白質。多條印跡法可增加產量,同時將印跡間的差異性降至最低。目前正在開發新技術,以減少產生信號所需的蛋白質量,並改善 Western 印跡技術的定量能力。
工作流程
凝膠電泳
蛋白質凝膠電泳是用來在印染前分離和解析蛋白質。將製備好的蛋白質混合物放在聚丙烯酰胺凝膠上,按分子量和電荷將蛋白質分類。
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