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Merck

Western Blotting

Western 印跡實驗室。蛋白質檢測的 Western 印跡技術

Western印跡是一種成熟的蛋白質檢測、分析和定量分析技術。此方法廣泛用於檢測複雜樣品(如組織勻質物和細胞裂解液)中的特定蛋白質分子。Western 印迹法通常是通过凝胶电泳分离蛋白质,然后转移到聚偏二氟乙烯 (PVDF) 或硝酸纤维素膜上。轉移蛋白質後,可將其染色以進行可視化,並透過 N 端排序、質譜分析或免疫檢測直接進行識別。



特色類別

ReagentPlus 溶劑級產品
轉移膜及套件

根據目標蛋白質大小、應用、檢測方法和便利性,從各種 Immobilon® PVDF 膜中選擇最佳 Western 印迹和蛋白質免疫印跡性能。

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檢測底物與酵素
檢測底物與酵素

以酵素為基礎的蛋白質檢測工具提升生命科學研究。深入了解我們的底物和酵素陣列,驅動 ELISA、IHC、WB 等檢測。

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蛋白質電泳膠與緩衝液
蛋白質電泳膠與緩衝液

預製聚丙烯酰胺蛋白質凝膠、運行緩衝液,以及用於 PAGE 和 SDS-PAGE 蛋白質凝膠電泳的手澆法聚丙烯酰胺凝膠試劑。

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在 Western 印迹免疫檢測中,蛋白質通過與特異性抗體結合來鑒定。通常,一抗與 HRP 或 AP 結合的二抗結合,使用適當的底物進行化學發光或比色檢測。

在生物化學中,Western 印跡被廣泛用於檢測特定蛋白質的存在、確定轉譯後修飾的程度、在克隆應用中驗證蛋白質的表達、分析蛋白質和生物標誌物的表達水平、製作抗體表位圖,以及檢測臨床環境中的疾病標誌物。

在有限的樣本中同時分析更多蛋白質的需求,推動了印圖技術靈敏度和速度的持續研究。雙重印跡可消除非特異性互作所造成的假陽性。遠西印圖可檢測特定蛋白質與蛋白質之間的相互作用。西南印圖可用於鑑定與特定 DNA 序列互作的蛋白質。多條印跡法可增加產量,同時將印跡間的差異性降至最低。目前正在開發新技術,以減少產生信號所需的蛋白質量,並改善 Western 印跡技術的定量能力。

工作流程

細胞裂解蛋白質進行 Western 印圖。

蛋白質萃取

當處理細胞或組織時,必須先破壞樣品以分離蛋白質,然後再進行分析。裂解和萃取緩衝液使用去垢劑破壞細胞壁和膜,釋放蛋白質。最佳的緩衝液應根據樣本類型及目標蛋白的亞細胞定位來選擇。

凝膠電泳室,用於運行蛋白質凝膠。

蛋白質凝膠電泳是用來在印染前分離和解析蛋白質。將製備好的蛋白質混合物放在聚丙烯酰胺凝膠上,按分子量和電荷將蛋白質分類。

將蛋白轉移到 PVDF 膜上,使用 Western 印跡技術進行檢測。

通過電泳在凝膠上分離的蛋白質會被轉移到 PVDF 或硝酸纖維膜上固定。轉移使用電流將蛋白質從凝膠上拉到膜上(電印)。

Western blotting 使用一抗和 HRP 結合的二抗與底物檢測目標蛋白質。

使用一抗結合 HRP 或 AP 結合的二抗及適當的化學發光或比色底物來檢測目標蛋白,或使用螢光標示的一抗或二抗。

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