免疫組織化學

IHC組織製備、抗原檢索和預處理

通常，組織會固定、包埋在石蠟中，並使用顯微切片機切片進行IHC分析。初始組織製備之後的一個重要步驟是需要進行抗原檢索。例如，有些抗原可能需要較強烈的預處理才能「揭開」其抗體結合表位，而有些抗原可能根本不需要預處理。兩種常見的抗原擷取前處理方法包括熱誘導表位擷取 (HIER)，此方法將熱源與緩衝劑及酵素（蛋白酶 K）結合使用。第二種方法，蛋白水解誘導表位擷取 (Proteolytic-Induced Epitope Retrieval, PIER) 是另一種抗原擷取方法，可使用各種蛋白酶，例如蛋白酶 K、胰蛋白酶、糜蛋白酶或胃蛋白酶。

IHC 染色和檢測

組織製備和抗原擷取預處理之後，可透過多種方式觀察抗體與抗原的互動。一種常見的方法是使用與酵素（如辣根過氧化酶或鹼性磷酸酶）結合的一級抗體，該酵素會催化產色反應。另外，免疫螢光 (IF) 方法使用的是標記有螢光團的抗體，例如螢光素、羅丹明或 Alexa Fluor。另一種方法是使用未標示的第一抗體，再透過標示的第二抗體或更複雜的檢測系統進行間接抗原檢測。在這種情況下，每次檢測都應確定一抗和二抗的最佳滴度。