DN25

デオキシリボヌクレアーゼ I ウシ膵臓由来

lyophilized powder, Protein ≥85 %, ≥400 Kunitz units/mg protein

• 別名: デオキシリボヌクレアーゼ, DNase I, デオキシリボ核酸 5′-オリゴヌクレオチド-ヒドロラーゼ
• CAS番号: 9003-98-9
• Enzyme Commission number: 3.1.21.1 (BRENDA, IUBMB)
• EC Number: 232-667-0
• MDL番号: MFCD00130918
• UNSPSCコード: 12352204
• NACRES: NA.54

特性

• 由来生物: bovine pancreas
• 形状: lyophilized powder
• 比活性: ≥400 Kunitz units/mg protein
• 分子量: ~31 kDa
• 組成: Protein, ≥85%
• テクニック: DNA extraction: suitable
• 溶解性: 0.15 M NaCl: soluble 5.0 mg/mL, hazy
• 適合性: suitable for molecular biology
• アプリケーション: diagnostic assay manufacturing; diagnostic assay manufacturing
• その他の活性: RNase ≤0.02%
• 輸送温度: wet ice
• 保管温度: −20°C

詳細

詳細

DNase I、あるいはデオキシリボヌクレアーゼIは、ウシ膵臓から単離したエンドヌクレアーゼです。

• メルクのDNase Iは、二重鎖および一重鎖DNAをオリゴおよびモノヌクレオチドへと分解します。
• ウシ膵臓DNaseには、等電点A、B、CおよびDを持った4つのアイソザイムが存在します（5.22、4.96、5.06および4.78）。3。最も多いのはAであり、次いでBおよびCが多く、Dは少量存在します。
• DNase Iの構造はエキソヌクレアーゼIIIの構造と類似しており、2つの中心的なßシートを有します。各βシートは6本のβ鎖からなります。このβシートの複合体は、広範なループとαヘリックス領域で囲まれています。本酵素はエキソヌクレアーゼIIIと類似した構造を持っています。^[1]

アプリケーション

• 粘度を減少させて、初代細胞単離におけるDNA除去による収量を向上：
• DNAへの標識塩基の取り込み：DNAニック
• 放射活性標識
• バイオプロセシング用途：DNA除去
• RT-PCRの前にRNA調製物からゲノムDNAを除去する
• in vitro転写
• ニック翻訳
• DNaseフットプリント法
• 細胞中のアクチン重合のアクチン調節、および細胞アポトーシス
• 核酸へのタンパク質のUV架橋結合
• DNaseは、細胞中のアクチン重合の調節に一定の役割を果たし、アポトーシスプロセスに関与^[1]

タンパク質サンプルからDNAを除去する際に使用します。

生物化学的／生理学的作用

DNアーゼIは、ピリミジンに隣接するホスホジエステル結合に作用して、末端に5'-リン酸を持ったポリヌクレオチドを生成するエンドヌクレアーゼです。DNアーゼIは、Mg²⁺の存在下、DNAの各鎖を独立して切断し、その切断場所はランダムです。両方のDNA鎖は、Mn²⁺存在下、ほとんど同じ場所で切断されます。Mn²⁺、Ca²⁺、Co²⁺、およびZn²⁺などの二価カチオンは、酵素を活性化します。5 mMのCa²⁺は、プロテアーゼ消化に対して酵素を安定化します。至適pHは7～8であることが分かっています。ウシ膵臓由来DNアーゼIは、クロマトグラフィーによって区別される4つのコンポーネント A、B、CおよびDからなり、それらのモル比はそれぞれ、4：1：1です。Dは少量だけ含まれます。2-メルカプトエタノール、キレート剤、ドデシル硫酸ナトリウム（SDS）およびアクチンは、酵素活性を阻害することが知られています。

特徴および利点

メルクのデオキシリボヌクレアーゼDNAse Iは、基本的にRNAseを含まず、製品応用をサポートします。

単位の定義

1 Kunitz単位は、タイプIまたはIIIのDNAを基質に使用して、pH 5.0、25°C、1 mLで、1分間に、0.001のA₂₆₀における吸光度変化を生成します。

物理的形状

粗製試薬、塩化カルシウムを含有

調製ノート

0.15 MのNaClに溶解したDNアーゼIの10 mg/mL溶液のアリコートを-20°Cで1週間保存した場合、10％以下の活性が失われることがあります。同様の溶液を2～8°Cで保存した場合、約20％の活性が失われます。pH 5～7、60°Cでは、5時間まで活性が維持され、68°Cでは10分以下で活性が消失します。1 mg/mLの濃度で、酢酸バッファー（pH 5.0）およびトリスバッファー（pH 7.2）中では、1時間あたり6％の速さで活性が失われます。

アナリシスノート

ビウレット法により定量したタンパク質。

安全性情報

• ピクトグラム: GHS08
• シグナルワード: Danger
• 危険有害性情報: H334
• 注意書き: P261 - P284 - P501
• 危険有害性の分類: Resp. Sens. 1
• 保管分類コード: 11 - Combustible Solids
• WGK: WGK 3
• 引火点(°F): Not applicable
• 引火点(℃): Not applicable
• 個人用保護具 (PPE): Eyeshields, Gloves, type N95 (US)