04536282001

組み換え型デオキシリボヌクレアーゼI

grade I, from bovine pancreas, expressed in Pichia pastoris

• EC Number: 3.1.21.1 (BRENDA, IUBMB)
• NACRES: NA.28
• UNSPSC Code: 12352204
• Form: lyophilized
• Solubility: water: soluble
• Storage temp.: 2-8°C

特性

• biological source: bovine pancreas
• recombinant: expressed in Pichia pastoris
• form: lyophilized
• specific activity: (>10,000 U/bottle according to Kunitz (+25°C; DNA as substrate).)
• mol wt: 39 kDa
• packaging: pkg of 2 × 10,000 U
• manufacturer/tradename: Roche
• concentration: ≥70-90%
• technique(s): protein extraction: suitable
• color: white to light yellow
• solubility: water: soluble
• suitability: suitable for molecular biology
• NCBI accession no.: NM_174534
• UniProt accession no.: P00639
• application(s): sample preparation
• foreign activity: Proteases, none detected, RNase, none detected
• storage temp.: 2-8°C
• Gene Information: bovine ... DNASE1(282217)

詳細

General description

特性：最大の活性を得るのに二価カチオンを必要とする、二本鎖特異的エンドヌクレアーゼ。
活性：1容器あたりKunitz単位で10,000U（+25℃、DNAを基質とする)。
単位の定義：1単位は、アッセイ条件下で1分あたり吸光度を0.001増加させる酵素活性です。

一本鎖および二本鎖DNAを分解します：二本鎖の活性を最大にするには二価カチオンが必要です。

Application

• 組み換え型デオキシリボヌクレアーゼIグレードIは、タンパク質単離手順でDNAを除去するために用いられます。
• クロマチン構造の分析
• 試料調製におけるDNAの除去

Features and Benefits

含量
凍結乾燥

Preparation Note

活性化因子: この酵素は、最大活性を得るために二価カチオンを必要とします。反応の特異性は用いるカチオンの性質によって決まります。DNase IはMg²⁺存在下でdsDNAにニックを入れる一方、Mn²⁺存在下では二本鎖を同時切断します。
保管条件（使用溶液）：溶解酵素の長期保存

DNase Iの一般的推奨溶媒は水です。デオキシリボヌクレアーゼIを水中でもどす場合、溶液は2～8℃で2日間保存可能であり、－15～－20℃では1か月間保存可能です。最良の結果を得るには、適切なアリコートを調製し、凍結と溶解を繰り返さないようにします。一方、長期間保存するには以下の緩衝液の1つでデオキシリボヌクレアーゼIを注意深く溶解します。この酵素は緩衝液1で数週間安定です。この酵素は、緩衝液2、3または4で溶解して推奨温度で保存すれば少なくとも18か月間安定です。

注意：この酵素は溶解中に撹拌しないでください。
緩衝液1：20 mM Tris-HCl、20 mM MgCl₂、5 mM CaCl₂、0.1 mMジチオエリスリトール、0.1 mM EDTA、50% (v/v)グリセロール、pH 8。緩衝液1は－15～－25℃で保存してください。この温度では凍結せず、数週間安定です。
緩衝液2：20 mM Tris-HCl、50 mM NaCl、1 mMジチオエリスリトール、100 μg/mL BSA、50%グリセロール(v/v)、pH 7.6。緩衝液2は－15～－25℃で最長18か月間保存してください。この温度では凍結しません。
緩衝液3：20 mM Tris-HCl、1 mM MgCl₂、50% (w/v)グリセロール、pH 7.5。緩衝液2は－15～－25℃で最長18か月間保存してください。この温度では凍結しません。
緩衝液4：20 mM Tris-HCl、1 mM MgCl₂、pH 7.5。適量（例：10μL）で分注し、ドライアイス上で急速凍結し、－60℃以下で保存してください（最長18か月間）。各実験に必要な量のみ解凍します。再凍結させないでください。解凍した溶液が残ったら廃棄します。

しっかりと閉めた状態。乾燥状態。

Other Notes

クニッツによれば、1単位はアッセイ条件下で260 nm吸光度を1 mLで0.001/分増加させる酵素活性です。容量活性は、0.1 Mの酢酸ナトリウム、5m MのMgSO₄、pH 5.0で測定します。
アッセイ混合物：ウシ胸腺DNA (100 μg)は、+25°Cにて20～50単位のデオキシリボヌクレアーゼIでインキュベートされます。
吸光度の増加は260 nmにおいて測定します。

情報ノート：クニッツによれば、クニッツのアッセイは高い再現性と感度をもたらすため、これらの条件は活性の測定に用いられます。この酵素を通常の実験目的に用いる場合、ロシュは、例えば標準的な文献(Sambrookら、Curr.Prot.Mol.Biol.、など)で言及された、所定の用途に適するインキュベーション緩衝液を用いることを推奨します。

生命科学研究用途に限ります。診断措置において使用しないでください。

安全性情報

• ピクトグラム: GHS08
• 注意喚起語: Danger
• 注意事項: P261 - P280 - P284 - P304 + P340 - P333 + P313 - P342 + P311
• Hazard Classifications: Resp. Sens. 1 - Skin Sens. 1
• 保管分類: 11 - Combustible Solids
• 一体何が起きているの？: WGK 1
• 引火点 (F): does not flash
• 引火点（°C）: does not flash
• ハザードコード: H317,H334