D4527

デオキシリボヌクレアーゼ I ウシ膵臓由来

Type II, lyophilized powder, Protein ≥80 %, ≥2,000 units/mg protein

• 別名: DNase I, デオキシリボ核酸 5′-オリゴヌクレオチド-ヒドロラーゼ
• CAS番号: 9003-98-9
• Enzyme Commission number: 3.1.21.1 (BRENDA, IUBMB)
• EC Number: 232-667-0
• MDL番号: MFCD00130918
• UNSPSCコード: 12352204
• NACRES: NA.54

特性

• 由来生物: bovine pancreas
• タイプ: Type II
• 形状: lyophilized powder
• 比活性: ≥2,000 units/mg protein
• 分子量: ~31 kDa
• 精製方法: chromatography
• 組成: Protein, ≥80%
• テクニック: DNA extraction: suitable
• 溶解性: 0.15 M NaCl: soluble 5.0 mg/mL, clear
• 適合性: suitable for molecular biology
• アプリケーション: diagnostic assay manufacturing; diagnostic assay manufacturing
• その他の活性: Chymotrypsin ≤0.01%; Protease ≤0.005%; RNase ≤0.01%
• 輸送温度: wet ice
• 保管温度: −20°C

詳細

アプリケーション

DNアーゼIは、DNAにラベル化した塩基を取り込むための最初のステップとして、ニックDNAに使用されます。Sigmaの本酵素は、メイディン・ダービー・イヌ腎臓（MDCK）II細胞株の細胞ライセートの調製において、ヌクレアーゼストックとしてRNアーゼとともに使用されています。また、シンドビスウイルスからのRNAの抽出にも使用されています。

ウシ膵臓由来デオキシリボヌクレアーゼIは、デオキシリボヌクレアーゼIに類似した2つの新たなヒト遺伝子の同定、位置決定、および発現に使用されています。また、ウシ膵臓由来デオキシリボヌクレアーゼIは、ウシ膵臓由来の高活性RNアーゼ、DNアーゼ、コレステロールエステラーゼ、およびトリプシンを得るための新しいアプローチの検討にも使用されています。

タンパク質サンプルからDNAを除去する際に使用します。

生物化学的／生理学的作用

DNアーゼIは、ピリミジンに隣接するホスホジエステル結合に作用して、末端に5'-リン酸を持ったポリヌクレオチドを生成するエンドヌクレアーゼです。DNアーゼIは、Mg²⁺の存在下、DNAの各鎖を独立して切断し、その切断場所はランダムです。両方のDNA鎖は、Mn²⁺存在下、ほとんど同じ場所で切断されます。至適pHは7～8であることが分かっています。Mn²⁺、Ca²⁺、Co²⁺、およびZn²⁺などの二価カチオンは、酵素を活性化します。5 mMのCa²⁺は、プロテアーゼ消化に対して酵素を安定化します。ウシ膵臓由来DNアーゼIは、クロマトグラフィーによって区別される4つのコンポーネント A、B、CおよびDからなり、それらのモル比はそれぞれ、4：1：1です。Dは少量だけ含まれます。2-メルカプトエタノール、キレート剤、ドデシル硫酸ナトリウム（SDS）およびアクチンは、酵素活性を阻害することが知られています。

特徴および利点

DNAニッキングと タンパク質サンプルからのDNAの除去に有効です

単位の定義

1 Kunitz単位は、タイプIまたはIIIのDNAを基質に使用して、pH 5.0、25°C、1 mLで、1分間に0.001のA₂₆₀における吸光度変化を生成します。

物理的形状

塩化カルシウムを含有

調製ノート

酵素粉末は、水か、リン酸バッファー以外のバッファー（pH 4.0～9.0）に溶解できます。カルシウムのキレート剤は避けてください。0.15 MのNaClに溶解したDNアーゼIの10 mg/mL溶液のアリコートを-20°Cで1週間保存した場合、10％以下の活性が失われることがあります。同様の溶液を2～8°Cで保存した場合、約20％の活性が失われます。pH 5～7、60°Cでは、5時間まで活性が維持され、68°Cでは10分以下で活性が消失します。1 mg/mLの濃度で、酢酸バッファー（pH 5.0）およびトリスバッファー（pH 7.2）中では、1時間あたり6％の速さで活性が失われます。

アナリシスノート

タンパク質はビウレット法で測定。

安全性情報

• ピクトグラム: GHS08
• シグナルワード: Danger
• 危険有害性情報: H334
• 注意書き: P261 - P284 - P501
• 危険有害性の分類: Resp. Sens. 1
• 保管分類コード: 11 - Combustible Solids
• WGK: WGK 3
• 引火点(°F): Not applicable
• 引火点(℃): Not applicable