Proces a schéma shRNA

Co je shRNA?

Krátká vlasová RNA (shRNA) je typ technologie interference RNA (RNAi), která se využívá ke studiu funkce neznámých genů. RNAi funguje tak, že umlčí funkci genů a umožní tak zkoumat ovlivněné procesy. Používá se k charakterizaci biologických drah prostřednictvím identifikace interakcí mezi geny a geny a proteiny. Pomáhá také prohloubit naše znalosti o molekulárních mechanismech, které jsou základem chorobných stavů

Jak shRNA funguje

Experimentálně lze RNAi indukovat pomocí syntetických duplexů malé interferující RNA (siRNA) nebo pomocí shRNA exprimované buď z plazmidového vektoru, nebo z genomové DNA po integraci zprostředkované lentivirem. ShRNA lze do buněk dopravit lipidovou transfekcí plazmidových vektorů nebo transdukcí lentivirových částic. Sekvence shRNA je zakódována v dodané sekvenci a exprese shRNA v jádře je řízena buď promotorem RNA Pol III (včetně U6 nebo H1), nebo promotorem RNA Pol II (například CMV).

ShRNA je štěpena endogenním enzymem Dicer za vzniku požadovaných duplexů siRNA, které se následně spojí s RISC. Při dodání shRNA pomocí lentivirových vektorů se sekvence kódující shRNA integruje do genomu a účinek knockdownu se přenáší na dceřiné buňky, což umožňuje pokračovat v umlčování genů.

RNAi lze také indukovat syntetickými siRNA v rozmezí 19-21 párů bází s 2 nukleotidovými převisy. siRNA lze do buněk dodat pomocí lipidové transfekce i jinými metodami. Jakmile se dostanou do buňky, spojí se přímo s RISC.

shProcesní schéma RNA

Podívejte se na naši nabídku shRNA klonů a obrazovek zde