Proč používat antibiotika v buněčných kulturách?

Používání antibiotik v buněčných kulturách minimalizuje ztráty cenných buněk, činidel, času a úsilí způsobené kontaminací. Udržování aseptických podmínek a technik je pro výzkumnou laboratoř, která pracuje s buněčnými/tkáňovými kulturami, životně důležité. Zkušení výzkumní pracovníci doporučují při kultivaci buněk používat antibiotika testovaná na buněčné kultury v odpovídajících koncentracích. Tento postup zachovává buňky tím, že zabraňuje kontaminaci, která vyvolává morfologické nebo fyziologické změny. Kromě prevence kontaminace fungují některá antibiotika také jako selekční činidla, která se používají k výběru a založení transfekovaných/geneticky modifikovaných buněk pro výzkumné účely.

• Bakteriální a plísňová kontaminace
• Kontaminace mykoplazmaty
• Kontaminace viry
• .Kdy byste měli použít antibiotika v buněčné kultuře

Bakteriální a houbová kontaminace

Bakteriální a houbová kontaminace je v buněčných kulturách nejvýraznější z důvodu rychlé kolonizace v obohacených médiích. Médium se zakalí a změní barvu (změna pH) během několika hodin/dnů po kontaminaci. Pravidelná mikroskopická pozorování a přidávání antibiotik do kultivačního média zabraňují šíření kontaminace napříč kulturami (viz tabulka níže).

Antibiotikum	.Bakterie		Houby	Kvasinky	Mycoplasma
	Mykolymfa pozitivní	Mykolymfa negativní/b>
Amphotericin B			✓	✓
Ampicilin	✓	✓
Erythromycin	✓	✓
Gentamycin	.✓	✓
Kanamycin	✓	✓			✓
Neomycin	✓	✓
Nystatin			✓	✓
Penicillin-Streptomycin	✓	✓
Polymyxin B		✓
Tetracyklin	✓	✓
Thiabendazol			✓
Tylosin					✓

Vyberte správná antibiotika pro vaše buňky.

Určete vhodnou koncentraci antibiotik pro vaše buňky.

Kontaminace mykoplazmaty

Mycoplasma jsou nejmenší, volně žijící (0.3 µM) prokaryota pozorovaná jako vláknité nebo kokální formy pod skenovacím elektronovým mikroskopem. Kontaminace mykoplazmaty je kryptická a je velmi náročná na zpracování. Pod světelným mikroskopem jsou nezjistitelné, ale vedou k morfologickým změnám, chromozomovým aberacím a změně metabolismu aminokyselin a nukleových kyselin. Vzhledem k absenci buněčné stěny jsou rezistentní vůči běžně používaným antibiotikům. Přestože jsou účinná specifická antibiotika, jako nejlepší prostředky proti mykoplazmě se osvědčila kombinace více biologických látek.

Nejlepší prevencí proti kontaminaci mykoplazmaty je používat buněčné linie z ECACC které jsou pravidelně testovány na kontaminaci mykoplazmaty.

Kontaminace viry

Viry jsou nejobtížněji zjistitelnými kontaminanty v buněčných kulturách a obtížně se odstraňují. Kontaminace je však samovolná, protože viry jsou závislé výhradně na hostitelském buněčném mechanismu. Virově infikované buňky představují pro laboratorní personál zdravotní riziko. Použití séra testovaného na BVDV výrazně snižuje riziko virů. 

.Kdy byste měli používat antibiotika v buněčných kulturách

• Antibiotika slouží k ochraně vysoce cenných zásob nenahraditelných kultur a k výrobě pracovních zásob. Pokud jsou rozhodující reprodukovatelné výsledky, doporučuje se přidávat ke kulturám optimální koncentrace vhodných antibiotik.
• Antibiotika jako Penicilin-Streptomycin roztok v koncentraci 50-100 I.U./ml se doporučují pro primární buněčné kultury, protože možnost kontaminace je během prvních několika týdnů vysoká. 
• Antibiotika poskytují další vrstvu ochrany před faktory, jako jsou noví výzkumníci v rámci školení, částice a aerosoly.
  
• Antibiotika se také používají k selekci buněk upravených genovým inženýrstvím (selekční činidla). Puromycin a hygromycin B se používají k selekci a založení buněk exprimujících geny rezistence vůči puromycinu, resp. hygromycinu.

Není správné se domnívat, že antibiotika jsou pro buněčné kultury zcela špatná; správný přístup je používat při pokusech s buněčnými kulturami optimální koncentraci, abyste zabránili kontaminaci a ochránili buňky v laboratoři.

Klikněte a prohlédněte si celé naše portfolio antibiotik pro vaše výzkumné použití.

Klikněte a prozkoumejte celou naši nabídku buněčných kultur pro vaše výzkumné využití.