Protokoly pro transfekci běžných buněčných linií pomocí transfekčních činidel X-tremeGENE™

X-tremeGENE™ transfekční činidla poskytují spolehlivou transfekci různých nukleových kyselin a komponent CRISPR/Cas9, což je kritický krok pro váš molekulární a buněčný výzkum. Projděte si náš seznam nejběžnějších buněčných linií níže, kde najdete podrobné pokyny k použití portfolia X-tremeGENE™. Hledáte maximální flexibilitu? Nové X-tremeGENE™ 360 transfekční činidlo je univerzální polymer, který poskytuje vynikající výkon pro běžně používané i obtížně transfekovatelné buněčné linie.

• Transfekce buněk CHO-K1
• Transfekce buněk COS-7
• HeLa buňky
• NIH-3T3 buňky
• HEK-293 Cells
• PC-3 buňky
• HCT 116 buňky
• A549 Cells
• MCF-7 Cells
• HuH-7 Cells
• HuH-7 Cells
• U-2 OS buňky
• HepG2 buňky
• Neuro-2a buňky
• Primární MEF buňky
• Human Primary Fibroblasts from Pre-Skin
• Murinské mezenchymální kmenové buňky EK8
• Lidské mezenchymální kmenové buňky
• HEK-293T buňky pro výrobu lentivirů
• SF9 Insect Cells

Transfekce buněk CHO-K1

Buňky CHO-K1 umístěte na desku s hustotou 1.5 X 10⁴ buněk/jamku. Rozložte buňky do 96jamkové destičky v objemu 100 μl kompletního růstového média na jamku 18 - 24 hodin před transfekcí  (65 - 75% konfluence). Inkubujte buněčné kultury přes noc.

Počkejte, až se činidlo X-tremeGENE™ 9 pro transfekci DNA, DNA a ředicí médium (Opti-MEM^® I Reduced Serum Medium nebo médium bez séra) zahřejí na +15 °C až +25 °C, a jemně je promíchejte.

• Dejte 200 μl ředidla do sterilní zkumavky.
• Přidejte 6 μl X-tremeGENE™ 9 DNA Transfection Reagent do ředidla. Jemně promíchejte pipetou.

• Přidejte 2 μg plasmidové DNA (poměr 3:1 činidla k DNA). Jemně promíchejte pipetou.
• Inkubujte 15 - 30 min při teplotě +15 °C až +25 °C.

• Přidejte 5 μl transfekčního komplexu k buňkám po kapkách.
• Mírně protřepejte nebo otáčejte jamkami nebo baňkami, abyste zajistili rovnoměrnou distribuci po celé destičce.
• Před měřením exprese proteinu inkubujte buňky po dobu 24 - 72 hodin.

Výsledek experimentu: Buňky CHO-K1 byly úspěšně transfekovány plazmidem pcDNA3.1-GFP pomocí přípravku X-tremeGENE™ 9 DNA Transfection Reagent.

Transfekce buněk COS-7

Buňky COS-7 se umístí na plochu o hustotě 8.0 - 9,0 X 10³ buněk/jamku. V 96jamkové destičce 18 - 24 hodin před transfekcí  (75 - 85% konfluence) rozložte buňky do objemu 100 μl kompletního růstového média na jamku. Inkubujte buněčné kultury přes noc.

Odstraňovač X-tremeGENE™ 9 pro transfekci DNA, DNA a ředidlo (Opti-MEMR^® I Reduced Serum Medium nebo médium bez séra) nechte zahřát na teplotu +15 °C až +25 °C a jemně promíchejte.

• Dejte 200 μl ředicího roztoku do sterilní zkumavky.
• Přidejte 6 μl X-tremeGENE™ 9 DNA Transfection Reagent do ředidla. Jemně promíchejte pipetou.

• Přidejte 2 μg plasmidové DNA (poměr 3:1 činidla k DNA). Jemně promíchejte pipetou.
• Inkubujte 15 - 30 min při teplotě +15 °C až +25 °C.

• Přidejte 5 μl transfekčního komplexu k buňkám po kapkách.
• Mírně protřepejte nebo otáčejte jamkami nebo baňkami, abyste zajistili rovnoměrnou distribuci po celé destičce.
• Před měřením exprese proteinu inkubujte buňky po dobu 24 - 72 hodin.

Výsledek experimentu: Buňky COS-7 byly úspěšně transfekovány plazmidem pcDNA3.1-GFP pomocí činidla X-tremeGENE™ 9 DNA Transfection Reagent.

Transfekce HeLa buněk

Buňky HeLa se umístí na desku v hustotě 1.5 X 10⁴ buněk/jamku. V 96jamkové destičce 18 - 24 hodin před transfekcí  (konfluence 70 - 90 %) rozložte buňky do objemu 100 μl kompletního růstového média na jamku. Inkubujte buněčné kultury přes noc.

Počkejte, až se činidlo X-tremeGENE™ 9 Transfection Reagent, DNA a ředidlo (Opti-MEM^® I Reduced Serum Medium nebo médium bez séra) zahřejí na +15 °C až +25 °C, a jemně je promíchejte.

• Dejte 200 μl ředicího roztoku do sterilní zkumavky.
• Přidejte 6 μl X-tremeGENE™ 9 DNA Transfection Reagent do ředidla. Jemně promíchejte pipetou.

• Přidejte 2 μg plasmidové DNA  (poměr 3:1 činidla k DNA). Jemně promíchejte pipetou.
• Inkubujte 15 - 30 min při teplotě +15 °C až +25 °C.

• Přidejte 5 μl transfekčního komplexu k buňkám po kapkách.
• Mírně protřepejte nebo otáčejte jamkami nebo baňkami, abyste zajistili rovnoměrnou distribuci po celé destičce.
• Před měřením exprese proteinu inkubujte buňky po dobu 24 - 72 hodin.

Výsledek experimentu: Buňky HeLa byly úspěšně transfekovány plazmidem pcDNA3.1-GFP pomocí činidla X-tremeGENE™ 9 DNA Transfection Reagent.

Transfekce buněk NIH-3T3

Buňky NIH-3T3 byly umístěny na plochu o hustotě 1.5 X 10⁴ buněk/jamku. Rozložte buňky do objemu 100 μl kompletního růstového média na jamku v 96jamkové destičce 18 - 24 hodin před transfekcí (70 - 80 % konfluence). Inkubujte buněčné kultury přes noc.

Počkejte, až se činidlo X-tremeGENE™ 9 pro transfekci DNA, DNA a ředicí médium (Opti-MEM^® I Reduced Serum Medium nebo médium bez séra) zahřejí na +15 °C až +25 °C, a jemně je promíchejte.

• Dejte 200 μl ředicího roztoku do sterilní zkumavky.
• Přidejte 6 μl X-tremeGENE™ 9 DNA Transfection Reagent do ředidla. Jemně promíchejte pipetou.

• Přidejte 2 μg plasmidové DNA (poměr 3:1 činidla k DNA). Jemně promíchejte pipetou.
• Inkubujte 15 - 30 min při teplotě +15 °C až +25 °C.

• Přidejte 5 μl transfekčního komplexu k buňkám po kapkách.
• Jemně protřepejte nebo otáčejte jamkami nebo baňkami, abyste zajistili rovnoměrnou distribuci po celé destičce.
• Inkubujte buňky po dobu 24 - 72 hodin před měřením exprese proteinu.

Výsledek experimentu: Buňky NIH-3T3 byly úspěšně transfekovány plazmidem pcDNA3.1-GFP pomocí činidla X-tremeGENE™ 9 DNA Transfection Reagent.

Transfekce buněk HEK-293

Buňky HEK-293 byly umístěny na plochu o hustotě 3.0 - 3,5 X 10⁴ buněk/jamku. V 96jamkové destičce 18 - 24 hodin před transfekcí  (50 - 70% konfluence) rozložte buňky do objemu 100 μl kompletního růstového média na jamku. Inkubujte buněčné kultury přes noc.

Odstraňovač X-tremeGENE™ HP DNA Transfection Reagent, DNA a ředidlo (Opti-MEM^® I Reduced Serum Medium nebo médium bez séra) nechte zahřát na +15 °C až +25 °C a jemně je promíchejte.

• Dejte 200 μl ředidla do sterilní zkumavky.
• Přidejte 2 μg plazmidové DNA. Pipetou jemně promíchejte.

• Přidejte 6 μLX-tremeGENE™ HP DNA Transfection Reagent  k naředěné DNA. (poměr 3:1 činidla k DNA). Jemně promíchejte pipetou.
• Inkubujte 15 - 30 min při teplotě +15 °C až +25 °C.

• Přidejte 10 μl transfekčního komplexu k buňkám po kapkách.
• Jemně protřepejte nebo otáčejte jamkami nebo baňkami, abyste zajistili rovnoměrnou distribuci po celé destičce.
• Inkubujte buňky po dobu 24 - 72 hodin před měřením exprese proteinu.

Výsledek experimentu: Buňky HEK-293 byly úspěšně transfekovány plazmidem pcDNA3.1-GFP pomocí X-tremeGENE™ HP DNA Transfection Reagent.

Transfekce buněk PC-3

Buňky PC-3 byly umístěny na plochu o hustotě 1.0 - 1,2 X 10⁴ buněk/jamku. Rozložte buňky do objemu 100 μl kompletního růstového média na jamku v 96jamkové destičce 18 - 24 hodin před transfekcí (75 - 85% konfluence). Inkubujte buněčné kultury přes noc.

Odstraňovač X-tremeGENE™ HP DNA Transfection Reagent, DNA a ředidlo (Opti-MEM^® I Reduced Serum Medium nebo médium bez séra) nechte zahřát na +15 °C až +25 °C a jemně je promíchejte.

• Dejte 200 μl ředidla do sterilní zkumavky.
• Přidejte 2 μg plazmidové DNA. Pipetou jemně promíchejte.

Přidejte 2 μl X-tremeGENE™ HP DNA Transfection Reagent  k naředěné DNA. (poměr 1:1 činidla k DNA). Jemně promíchejte pipetou.

Inkubujte 15 - 30 min při teplotě +15 °C až +25 °C.

• Přidejte 10 μl transfekčního komplexu k buňkám po kapkách.
• Mírně protřepejte nebo otáčejte jamkami nebo baňkami, abyste zajistili rovnoměrnou distribuci po celé destičce.
• Před měřením exprese proteinu inkubujte buňky po dobu 24 - 72 hodin.

Výsledek experimentu: Buňky PC-3 byly úspěšně transfekovány plazmidem pcDNA3.1-GFP pomocí X-tremeGENE™ HP DNA Transfection Reagent.

Transfekce buněk HCT 116

Buňky HCT 116 byly umístěny na plochu o hustotě 3.0 - 4,0 X 10⁵ buněk/jamku. Rozložte buňky do objemu 1 ml kompletního růstového média na jamku v 12jamkové destičce 18 - 24 hodin před transfekcí (80% konfluence). Inkubujte buněčné kultury přes noc.

Počkejte, až se činidlo X-tremeGENE™ HP DNA Transfection Reagent, DNA a ředidlo (Opti-MEM^® I Reduced Serum Medium nebo médium bez séra) zahřejí na +15 °C až +25 °C, a jemně je vortexujte.

• Dejte 100 μl ředidla do sterilní zkumavky.
• Přidejte 1 μg plazmidové DNA. Pipetou jemně promíchejte.

• Přidejte 2 μl X-tremeGENE™ HP DNA Transfection Reagent k naředěné DNA. (poměr 2:1 činidla k DNA). Jemně promíchejte pipetou.
• Inkubujte 15 - 30 min při teplotě +15 °C až +25 °C.

• Přidejte transfekční komplex k buňkám po kapkách.
• Mírně protřepejte nebo otáčejte jamkami nebo baňkami, abyste zajistili rovnoměrnou distribuci po celé destičce.
• Před měřením exprese proteinu inkubujte buňky po dobu 24 - 72 hodin.

Transfekce buněk A549

Buňky A549 umístěte na destičku v hustotě 2.8 X 10⁴ buněk/jamku. Rozložte buňky do objemu 150 μl kompletního růstového média na jamku v 96jamkové destičce 18 - 24 hodin před transfekcí  (70% konfluence). Inkubujte buněčné kultury přes noc.

Počkejte, až se činidlo X-tremeGENE™ HP DNA Transfection Reagent, DNA a ředidlo (Opti-MEM^® I Reduced Serum Medium nebo médium bez séra) zahřejí na +15 °C až +25 °C, a jemně je promíchejte.

Dejte 500 μl ředidla do sterilní zkumavky.
Přidejte 5 μg plasmidové DNA. Pipetou jemně promíchejte.

• Přidejte 10 μl X-tremeGENE™ HP DNA Transfection Reagent k naředěné DNA. (poměr 2:1 činidla k DNA). Jemně promíchejte pipetou.
• Inkubujte 15 - 30 min při teplotě +15 °C až +25 °C.

• Přidejte 15 μl transfekčního komplexu k buňkám po kapkách.
• Mírně protřepejte nebo otáčejte jamkami nebo baňkami, abyste zajistili rovnoměrnou distribuci po celé destičce.
• Před měřením exprese proteinu inkubujte buňky po dobu 24 - 72 hodin.

Transfekce buněk MCF-7

Buňky MCF-7 umístěte na destičku v hustotě 1,2 - 1.8 X 10⁴ buněk/jamku. V 96jamkové destičce 18 - 24 hodin před transfekcí  (konfluence 70 - 90 %) rozložte buňky do objemu 100 μl kompletního růstového média na jamku. Inkubujte buněčné kultury přes noc.

Odstraňovač X-tremeGENE™ 9 DNA Transfection Reagent, DNA a ředidlo (Opti-MEM^® I Reduced Serum Medium nebo médium bez séra) nechte zahřát na teplotu +15 °C až +25 °C a jemně promíchejte.

• Vložte 200 μl ředidla do sterilní zkumavky.
• Přidejte 6 μl X-tremeGENE™ 9 DNA Transfection Reagent do ředidla. Jemně promíchejte pipetou.

• Přidejte 2 μg plasmidové DNA.  (poměr 3:1 činidla k DNA). Jemně promíchejte pipetou.
• Inkubujte 15 - 30 min při teplotě +15 °C až +25 °C.

• Přidejte 10 μl transfekčního komplexu k buňkám po kapkách.
• Mírně protřepejte nebo otáčejte jamkami nebo baňkami, abyste zajistili rovnoměrnou distribuci po celé destičce.
• Před měřením exprese proteinu inkubujte buňky po dobu 24 - 72 hodin.

Výsledek experimentu: Buňky MCF-7 byly úspěšně transfekovány plazmidem pcDNA3.1-GFP pomocí činidla X-tremeGENE™ 9 DNA Transfection Reagent.

Transfekce buněk HuH-7

Buňky HuH-7 se umístí na plochu o hustotě 1.0 X 10⁵ buněk/jamku. Buňky rozložte do objemu 2,5 ml kompletního růstového média na jamku v 6jamkové destičce 18 - 24 hodin před transfekcí. Inkubujte buněčné kultury přes noc.

Počkejte, až se činidlo X-tremeGENE™ HP DNA Transfection Reagent, DNA a ředidlo (Opti-MEM^® I Reduced Serum Medium nebo médium bez séra) zahřejí na +15 °C až +25 °C, a jemně je promíchejte.

• Vložte 100 μl ředicího roztoku do sterilní zkumavky.
• Přidejte 1,5 μg plasmidové DNA. Jemně promíchejte pipetou.

• Přidejte 1,5 μl X-tremeGENE™ HP DNA Transfection Reagent k naředěné DNA. (poměr 1:1 činidla k DNA). Jemně promíchejte pipetou.
• Inkubujte 15 - 30 min při teplotě +15 °C až +25 °C.

• Jednu hodinu před přidáním komplexů k buňkám osvěžte médium 1,5 ml média Opti-MEM I Reduced Serum Medium.
• Přidejte 100 μl transfekčního komplexu k buňkám po kapkách.
• Jemně protřepejte nebo otáčejte jamkami nebo baňkami, abyste zajistili rovnoměrné rozložení po celé destičce.
• Další den osvěžte médium kompletním růstovým médiem.
• Před měřením exprese proteinu inkubujte buňky po dobu 24 - 72 hodin.

Transfekce buněk U-2 OS

Buňky U-2 OS umístěte na desku o hustotě 2.5 - 3,0 X 10⁴ buněk/jamku. Vložte buňky do objemu 100 μl kompletního růstového média na jamku v 96jamkové destičce 18 - 24 hodin před transfekcí (konfluence 70 - 90 %). Inkubujte buněčné kultury přes noc.

Odstraňovač X-tremeGENE™ HP DNA Transfection Reagent, DNA a ředidlo (Opti-MEM^® I Reduced Serum Medium nebo médium bez séra) nechte zahřát na +15 °C až +25 °C a jemně je promíchejte.

• Dejte 200 μl ředidla do sterilní zkumavky.
• Přidejte 2 μg plazmidové DNA. Pipetou jemně promíchejte.

• Přidejte 4 μl X-tremeGENE™ HP DNA Transfection Reagent k naředěné DNA. (poměr 2:1 činidla k DNA). Jemně promíchejte pipetou.
• Inkubujte 15 - 30 min při teplotě +15 °C až +25 °C.

• Přidejte 10 μl transfekčního komplexu k buňkám po kapkách.
• Mírně protřepejte nebo otáčejte jamkami nebo baňkami, abyste zajistili rovnoměrnou distribuci po celé destičce.
• Před měřením exprese proteinu inkubujte buňky po dobu 24 - 72 hodin.

Výsledek experimentu: Buňky U-2 OS byly úspěšně transfekovány plazmidem pcDNA3.1-GFP pomocí X-tremeGENE™ HP DNA Transfection Reagent.

Transfekce buněk HepG2

Buňky HepG2 byly umístěny na desku o hustotě 2.0 - 2,5 X 10⁴ buněk/jamku. V 96jamkové destičce 18 - 24 hodin před transfekcí  (60 - 70% konfluence) rozložte buňky do objemu 100 μl kompletního růstového média na jamku. Inkubujte buněčné kultury přes noc.

Počkejte, až se činidlo X-tremeGENE™ 9 pro transfekci DNA, DNA a ředicí médium (Opti-MEM^® I Reduced Serum Medium nebo médium bez séra) zahřejí na +15 °C až +25 °C, a jemně je promíchejte.

• Vložte 500 μl ředicího roztoku do sterilní zkumavky.
• Přidejte 30 μl X-tremeGENE™ 9 DNA Transfection Reagent do ředidla. Jemně promíchejte pipetou.

• Přidejte 10 μg plasmidové DNA  (poměr 3:1 činidla k DNA). Jemně promíchejte pipetou.
• Inkubujte 15 - 30 min při teplotě +15 °C až +25 °C.

• Přidejte 5 μl transfekčního komplexu k buňkám po kapkách.
• Mírně protřepejte nebo otáčejte jamkami nebo baňkami, abyste zajistili rovnoměrnou distribuci po celé destičce.
• Před měřením exprese proteinu inkubujte buňky po dobu 24 - 72 hodin.

Výsledek experimentu: Buňky HepG2 byly úspěšně transfekovány plazmidem pcDNA3.1-GFP pomocí činidla X-tremeGENE™ 9 DNA Transfection Reagent.

Transfekce buněk Neuro-2a

Protokol poskytnutý zákazníkem.
Rozložte buňky Neuro-2a na destičky při hustotě 1,0 X 10⁵ buněk/jamku. Rozložte buňky do objemu 500 μl kompletního růstového média na jamku ve 24jamkové destičce 24 hodin před transfekcí  (30 - 40% konfluence). Inkubujte buněčné kultury přes noc.

Odstraňovač X-tremeGENE™ 9 pro transfekci DNA, DNA a ředidlo (Opti-MEM^® I Reduced Serum Medium nebo médium bez séra) nechte zahřát na teplotu +15 °C až +25 °C a jemně promíchejte.

• Dejte 100 μl ředidla do sterilní zkumavky.
• Přidejte 8 μl X-tremeGENE™ 9 DNA Transfection Reagent k ředidlu. Jemně promíchejte pipetou.

• Přidejte 2 μg plasmidové DNA. (poměr 4:1 činidla k DNA). Jemně promíchejte pipetou.
• Inkubujte 15 - 30 min při teplotě +15 °C až +25 °C.

• Přidejte 100 μl transfekčního komplexu k buňkám po kapkách.
• Jímky nebo baňky jemně protřepejte nebo jimi otáčejte, abyste zajistili rovnoměrné rozdělení po celé destičce.
• Před měřením exprese proteinů buňky inkubujte 24 - 72 hodin.

Poznámka: Za údaje a experimentální podmínky uvedené v "Protokolech poskytnutých zákazníky" odpovídají výhradně zákazníci, kteří je poskytli. Společnost Roche se nepodílela na stanovení experimentálních podmínek ani na definování kritérií pro provádění specifických testů. Společnost Roche proto nemůže převzít žádnou odpovědnost za výkon nebo interpretaci výsledků získaných pro biologický cílový parametr (parametry) popsaný (popsané) autory nebo jinými uživateli používajícími podobný experimentální přístup. exprese.

Výsledek experimentu: Buňky Neuro-2a byly úspěšně transfekovány plazmidem CMV6-GFP pomocí činidla X-tremeGENE™ 9 pro transfekci DNA.

Transfekce primárních MEF buněk

Plate primární MEF buňky v hustotě 0.5 - 1,0 X 10⁵ buněk/jamku. Rozložte buňky do objemu 1 ml kompletního růstového média na jamku v 12jamkové destičce 18 - 24 hodin před transfekcí (60% konfluence). Inkubujte buněčné kultury přes noc.

Počkejte, až se X-tremeGENE™ HP DNA Transfection Reagent, DNA a ředidlo (Opti-MEM^® I Reduced Serum Medium nebo médium bez séra) zahřejí na +15 °C až +25 °C, a jemně je promíchejte.

• Dejte 100 μl ředidla do sterilní zkumavky.
• Přidejte 1 μg plazmidové DNA. Pipetou jemně promíchejte.

• Přidejte 4 μl X-tremeGENE™ HP DNA Transfection Reagent k naředěné DNA. (poměr 4:1 činidla k DNA). Jemně promíchejte pipetou.
• Inkubujte 15 - 30 min při teplotě +15 °C až +25 °C.

• Přidávejte transfekční komplex k buňkám po kapkách.
• Mírně protřepejte nebo otáčejte jamkami nebo baňkami, abyste zajistili rovnoměrnou distribuci po celé destičce.
• Před měřením exprese proteinu inkubujte buňky po dobu 24 - 72 hodin.

Transfekce lidských primárních fibroblastů z předkožky

Na destičku umístěte lidské primární fibroblastové buňky při hustotě 1.0 X 10⁵ buněk/jamku. Rozložte buňky do objemu 2 ml kompletního růstového média na jamku v 6jamkové destičce 18 - 24 hodin před transfekcí (40 - 50 % konfl uence). Inkubujte buněčné kultury přes noc.

Odstraňovač X-tremeGENE™ HP DNA Transfection Reagent, DNA a ředidlo (Opti-MEM^® I Reduced Serum Medium nebo médium bez séra) nechte zahřát na +15 °C až +25 °C a jemně je promíchejte.

• Dejte 200 μl ředidla do sterilní zkumavky.
• Přidejte 2 μg plazmidové DNA. Pipetou jemně promíchejte.

• Přidejte 6 μl X-tremeGENE™ HP DNA Transfection Reagent k naředěné DNA. (poměr 3:1 činidla k DNA). Jemně promíchejte pipetou.
• Inkubujte 15 - 30 min při teplotě +15 °C až +25 °C.

• Přidejte 200 μl transfekčního komplexu k buňkám po kapkách.
• Mírně protřepejte nebo otáčejte jamkami nebo baňkami, abyste zajistili rovnoměrnou distribuci po celé destičce.
• Před měřením exprese proteinu inkubujte buňky po dobu 24 - 72 hodin.

Výsledek experimentu: Lidské primární fibroblasty byly úspěšně transfekovány GFP kódujícím plazmidem pomocí X-tremeGENE™ HP DNA Transfection Reagent.

Murské mezenchymální kmenové buňky EK8

Buňky EK8 byly umístěny na plochu v hustotě 3.0 X 10⁴ buněk/jamku. Rozložte buňky (3 X 10⁵ buněk/ml) do objemu 100 μl kompletního růstového média na jamku v 96jamkové destičce 24 hodin před transfekcí (50% konfluence). Inkubujte buněčné kultury přes noc.

Odstraňovač X-tremeGENE™ HP DNA Transfection Reagent, DNA a ředidlo (Opti-MEM^® I Reduced Serum Medium nebo médium bez séra) nechte zahřát na teplotu +15 °C až +25 °C a jemně vortexujte.

• Dejte 392 μl ředidla do sterilní zkumavky.
• Přidejte 8 μg plazmidové DNA. Pipetou jemně promíchejte.

• Přidejte 8 μl X-tremeGENE™ HP DNA Transfection Reagent  k naředěné DNA. (poměr 1:1 činidla k DNA). Jemně promíchejte pipetou.
• Inkubujte 15 - 30 min při teplotě +15 °C až +25 °C.

• Přidejte 10 μl transfekčního komplexu k buňkám po kapkách.
• Mírně protřepejte nebo otáčejte jamkami nebo baňkami, abyste zajistili rovnoměrnou distribuci po celé destičce.
• Před měřením exprese proteinu inkubujte buňky po dobu 24 - 72 hodin.

Transfekce lidských mezenchymálních kmenových buněk

Desky s hMSC o hustotě 8.0 X 10⁴ buněk/jamku. Buňky rozložte do objemu 2 ml kompletního růstového média na jamku v 6jamkové destičce 18 - 24 hodin před transfekcí (50% konfluence). Inkubujte buněčné kultury přes noc.

Počkejte, až se činidlo X-tremeGENE™ HP DNA Transfection Reagent, DNA a ředidlo (Opti-MEM^® I Reduced Serum Medium nebo médium bez séra) zahřejí na +15 °C až +25 °C, a jemně je vortexujte.

• Dejte 200 μl ředidla do sterilní zkumavky.
• Přidejte 2 μg plazmidové DNA. Pipetou jemně promíchejte.

• Přidejte 6 μl X-tremeGENE™ HP DNA Transfection Reagent k naředěné DNA. (poměr 3:1 činidla k DNA). Jemně promíchejte pipetou.
• Inkubujte 15 - 30 min při teplotě +15 °C až +25 °C.

• Přidejte 200 μl transfekčního komplexu k buňkám po kapkách.
• Jímky nebo baňky jemně protřepejte nebo jimi otáčejte, abyste zajistili rovnoměrné rozložení po celé destičce.
• Před měřením exprese proteinu inkubujte buňky po dobu 24 - 72 hodin.

Výsledek experimentu: Lidské mezenchymální kmenové buňky byly úspěšně transfekovány GFP kódujícím plazmidem pomocí X-tremeGENE™ HP DNA Transfection Reagent.

Transfekce buněk HEK-293T pro produkci lentivirů

Buňky HEK-293T se umístí na destičku o hustotě 5.0 X 10⁵ buněk/jamku. V 6jamkové destičce 18 - 24 hodin před transfekcí  (60 - 80% konfluence) rozložte buňky do objemu 2 ml kompletního růstového média na jamku. Inkubujte buněčné kultury přes noc.

Odstraňovač X-tremeGENE™ HP DNA Transfection Reagent, DNA a ředidlo (Opti-MEM^® I Reduced Serum Medium nebo médium bez séra) nechte zahřát na +15 °C až +25 °C a jemně je promíchejte.

• Dejte 180 μl ředidla do sterilní zkumavky.
• Přidejte 2 μg plazmidové DNA. (20 μl směsi plasmidové DNA v molárním poměru 1 : 2 : 2 = knihovní plasmid : obalový plasmid : obalový plasmid). Jemně promíchejte pipetou.

• Přidejte 6 μl X-tremeGENE™ HP DNA Transfection Reagent k naředěné DNA. (poměr 3:1  činidla k DNA). Jemně promíchejte pipetou.
• Inkubujte 15 - 30 min při teplotě +15 °C až +25 °C.

• Přidejte 200 μl transfekčního komplexu  k buňkám po kapkách.
• Mírně protřepejte nebo otáčejte jamkami nebo baňkami, abyste zajistili rovnoměrnou distribuci po celé destičce.
• Před měřením exprese proteinu inkubujte buňky po dobu 24 - 72 hodin.

Výsledek experimentu: Buňky HEK-293T byly úspěšně transfekovány plazmidem pGIPZ-eGFP pomocí X-tremeGENE™ HP DNA Transfection Reagent.

Transfekce hmyzích buněk SF9

Buňky SF9 byly umístěny na plochu o hustotě 0.5 X 10⁶ buněk/jamku. Bezprostředně před transfekcí rozložte buňky do 12jamkové destičky v objemu 1 ml kompletního růstového média na jamku. Buněčné kultury inkubujte přes noc.

Odstředek X-tremeGENE™ HP DNA Transfection Reagent, DNA a ředidlo (Opti-MEM^® I Reduced Serum Medium nebo médium bez séra) nechte zahřát na teplotu +15 °C až +25 °C a jemně je promíchejte.

• Vložte 100 μl ředidla do sterilní zkumavky.
• Přidejte 1 μg plazmidové DNA. Jemně promíchejte pipetou.

• Přidejte 8 μl X-tremeGENE™ HP DNA Transfection Reagent k naředěné DNA.  (poměr 8:1  činidla k DNA). Jemně promíchejte pipetou.
• Inkubujte 15 - 30 min při teplotě +15 °C až +25 °C.

• Přidejte transfekční komplex k buňkám po kapkách.
• Mírně protřepejte nebo otáčejte jamkami nebo baňkami, abyste zajistili rovnoměrnou distribuci po celé destičce.
• Před měřením exprese proteinu inkubujte buňky po dobu 24 - 72 hodin.

Pouze pro výzkum v oblasti přírodních věd. Není určeno k použití v diagnostických postupech.

Uvědomte si prosím, že protokoly jsou návrhy a že optimální podmínky musí být stanoveny empiricky.

1. Přípravek X-tremeGENE™ 9 pro transfekci DNA skladujte při teplotě +2 až +8 °C a přípravek X-tremeGENE™ HP pro transfekci DNA při teplotě -15 až -25 °C.
2. Přibližte lahvičku obsahující X-tremeGENE™ DNA Transfection Reagent na teplotu +15 až +25 °C a před odebráním požadovaného množství ji jednu sekundu vířivě promíchejte.
3. Nepřidávejte alikvotní části činidla X-tremeGENE™ DNA Transfection Reagent; zbývající transfekční činidlo uchovávejte v originálních skleněných lahvičkách.
4. Minimalizujte kontakt neředěného činidla X-tremeGENE™ DNA Transfection Reagent s plastovými povrchy.
5. Po odebrání potřebného množství ihned po použití těsně uzavřete víčko lahvičky.
6. Minimální množství X-tremeGENE™ DNA Transfection Reagent: DNA komplexu pro použití při transfekci je 100 μl. Tvorba komplexu při menším objemu výrazně snižuje účinnost transfekce.
7. Nepoužívejte zkumavky nebo mikrotitrační destičky vyrobené z polystyrenu pro X-tremeGENE™ DNA Transfection Reagent: Příprava komplexu DNA. Pokud se nemůžete vyhnout polystyrenovým materiálům, ujistěte se, že transfekční činidlo pipetujete přímo do média bez séra nebo do média se sníženým obsahem séra (které neobsahuje žádné sérum).
8. Nepoužívejte silikonizované hroty pipet nebo zkumavky.
9. Ujistěte se, že buňky v době transfekce stále aktivně rostou.
10. Při provádění transfekcí zahrňte vhodné kontroly tím, že do jamek zařadíte:
    (1) netransfekované buňky
    (2) buňky pouze s transfekčním činidlem
    (3) buňky pouze s DNA
11. Optimální poměr transfekčního činidla: DNA a optimální celkové množství komplexu se může lišit podle buněčné linie, hustoty buněk, stavu růstu buněk pro test a exprimovaného genu.