Protokol a řešení problémů s transfekčním činidlem X-tremeGENE™ siRNA

Výrobek č.SITRAN-RO

Protokol

Výrobce: SITRAN-RO

Transfekce siRNA v primárních plicních fibroblastech

Roche nemá pro tuto aplikaci žádné údaje, ale existuje zpráva od zákazníka, stručně popsaná níže.

Fibroblasty plic divokých potkanů byly úspěšně kotransfekovány plazmidem obsahujícím fibroblastový růstový faktor 2 (FGF2) a buď nespecifickou siRNA, proti luciferáze GL2, nebo specifickou siRNA proti FGF2. Použitý poměr byl 9 µl X-tremeGENE™ siRNA transfekčního činidla na 1 µg nukleové kyseliny.
Buňky byly sklizeny 66 hodin po transfekci a analyzovány pomocí western blotu. Jako kontrola zatížení byla použita hladina exprese ß-aktinu.
Vzorky transfekované siRNA GL2 nesnížily hladinu exprese FGF2 a ß-aktinu. FGF2 specifická siRNA vyvolala 45% pokles hladiny exprese FGF2.
Tyto výsledky ukazují, že X-tremeGENE™ siRNA transfekční činidla lze použít k účinné transfekci (a kotransfekci) plazmidů a siRNA do primárních buněk.

siRNA, reverzní TR a expresní plazmidy na transfekovaných buněčných mikročipech

Pomocí X-tremeGENE™ siRNA Transfection Reagent je možné transfekovat siRNA a expresní plazmidy na transfekované buněčné mikročipy.

Podrobnosti o experimentálním protokolu jsou uvedeny v tomto článku časopisu Biochemica: Efektivní reverzní transfekce siRNA i expresních plazmidů na transfekovaných buněčných mikročipech pomocí X-tremeGENE™ siRNA Transfection Reagent.

Řešení problémů

Precipitáty

Při přidávání DNA se mohou vyskytnout precipitáty, které nejsou způsobeny X-tremeGENE™ siRNA Transfection Reagent. Tvorba precipitátů může být způsobena vysokou koncentrací soli ve vzorku DNA. Společnost Roche doporučuje přečistit DNA pomocí souprav Genopure Plasmid Kits.