Reagencie pro disociaci buněk
Pro replikaci jejich přirozeného prostředí se adherentní buněčné fenotypy (např. epiteliální buňky) obvykle vysévají na povrchy ošetřené tkáňovými kulturami, ke kterým se přichytí, aby přežily a množily se. Pro množení, počítání a následnou analýzu je třeba adherentní buňky a buňky z pevných tkání disociovat a vytvořit suspenze. Suspenze z jednotlivých buněk jsou potřebné pro počítání buněk, opětovné nasazení pro subkultury a buněčné testy/analýzy.
Disociační činidla mohou zahrnovat přirozeně se vyskytující enzymy nebo šetrnější neenzymatické alternativy. Tato činidla fungují tak, že chelatují vápník, čímž zabraňují kadherinům, aby se připojily k povrchu nebo k sobě navzájem, a uvolňují buňky z těchto povrchů během kultivačního procesu. Disociační činidla, která se používají v pracovním postupu buněčné kultivace, mohou být specifická pro substráty extracelulární matrice (ECM).
Naše ucelená kolekce činidel pro disociaci buněk zahrnuje:
Trypsin, rekombinantní trypsin, StableCell™ Trypsin
Trypsin je serinová proteáza a jeden z nejběžnějších odštěpovacích enzymů používaných s adherentní buněčné linie a pro disociaci tkání. Bylo zjištěno, že surové trypsinové preparáty jsou obvykle účinnější pro obě aplikace, ale inkubace buněk s vysokou koncentrací trypsinu nebo po příliš dlouhou dobu představuje riziko poškození buněčných membrán a může vést k jejich usmrcení. Kultivované buňky se nejčastěji odstraňují z kultivačního substrátu působením trypsinu v kombinaci s EDTA (kyselina ethylendiamintetraoctová), v níž se koncentrace trypsinu může pohybovat od 0,025 % do 0,5 %.
Roztoky trypsinu StableCell™ byly vyvinuty tak, aby prováděly oddělování buněk stejně jako standardní roztoky trypsinu, bez nutnosti alikvotovat, zmrazovat a rozmrazovat trypsin. Tím se výrazně šetří čas, protože odpadá nutnost alikvotovat trypsin a čekat na jeho rozmrazení pro pasážování buněk nebo experimenty a uvolňuje se drahocenný prostor v laboratorních mrazničkách. Naše roztoky trypsinu StableCell™ se doporučují skladovat při teplotě 2-8 °C, ale naše studie ukazují, že trypsin StableCell™ si zachovává >90% aktivitu a výkonnost i při skladování při 37 °C.
Kollagenáza a dispáza
Kollagenáza štěpí peptidové vazby v nativním, trojšroubovicovém kolagenu. Díky své jedinečné schopnosti hydrolyzovat nativní kolagen se široce používá při izolaci buněk ze zvířecích tkání. Kolagenázy se vyskytují v různých mikroorganismech a v mnoha různých živočišných buňkách. Nejsilnější je "surová" kolagenáza vylučovaná anaerobní bakterií Clostridium histolyticum.
Dispázy jsou rychlé, účinné, šetrné a neutrální proteázy, které mohou oddělit neporušené epitelové listy v kultuře od substrátu. Dispáza I byla použita k trávení plicní tkáně a ke zpracování buněk pro průtokové barvení a také k izolaci myších CD4 T buněk.
Disociační činidla pro speciální kultury
Pro disociaci nebo oddělení typů buněk a tkání, které mohou vyžadovat jemnější enzymatickou aktivitu, Accutase® a Accumax™ roztoky používají účinné enzymy v nižší koncentraci. Tyto roztoky:
- Efektivně oddělují embryonální a neuronální kmenové buňky
- Šetrně oddělují pro zachování životaschopnosti buněk & mohou zvýšit výtěžnost buněk
- Nevyžadují neutralizaci /li>
Analýza jednotlivých buněk
Analýza jednotlivých buněk vyžaduje při práci se vzorky tkání jako vstup životaschopné jednotlivé buňky. Pomocí těchto analýz mohou vědci studovat odchylky v populacích buněčných kultur pro výzkum kmenových buněk, imunologie a rakoviny. Objevte naše vysoce kvalitní disociační činidla, která jsou nezbytná pro optimalizaci protokolů, vytváření osvědčených postupů a zajištění spolehlivých dat analýzy jednotlivých buněk.
Související zdroje produktů
- Brochure: Enzymes for Cell Dissociation and Lysis
- Protokol disociace buněk trypsinem
Trypsin se běžně používá k oddělování adherentních buněk od povrchu. K dispozici je široká škála trypsinových roztoků, které splňují vaše specifické požadavky na buněčné linie.
- Průvodce tkáňovou disociací: Typy enzymů kolagenáza, dispáza a liberáza
Kolagenázy, enzymy, které rozkládají přirozený kolagen, jenž drží živočišné tkáně pohromadě, jsou vytvářeny různými mikroorganismy a mnoha různými živočišnými buňkami.
Abyste mohli pokračovat ve čtení, přihlaste se nebo vytvořte účet.
Nemáte účet?