P8415

Peroxidase aus Meerrettich

Type XII, essentially salt-free, lyophilized powder, ≥250 units/mg solid (using pyrogallol)

• Synonym(e): Donor:hydrogen-peroxide oxidoreductase, Meerrettichperoxidase
• CAS-Nummer: 9003-99-0
• EC-Nummer: 1.11.1.7 (BRENDA, IUBMB)
• EG-Nummer: 232-668-6
• MDL-Nummer: MFCD00071339
• UNSPSC-Code: 12352204
• NACRES: NA.54

Eigenschaften

• Typ: Type XII
• Form: essentially salt-free, lyophilized powder
• Spezifische Aktivität: ≥250 units/mg solid (using pyrogallol)
• Mol-Gew.: ~44 kDa
• Löslichkeit: 0.1 M phosphate buffer: soluble (pH 6.0); H₂O: soluble
• Extinktionsverhältnis: RZ ≥3.0
• Lagertemp.: 2-8°C
• SMILES String: [O+H2]O[O-]
• InChI: 1S/H2O3/c1-3-2/h1-2H
• InChIKey: JSPLKZUTYZBBKA-UHFFFAOYSA-N

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

HRP ist ein einkettiges Polypeptid mit vier Disulfidbrücken. Es ist ein Glykoprotein mit einem Kohlenhydratanteil von 18 %. Die Kohlenhydratzusammensetzung besteht aus Galactose, Arabinose, Xylose, Fucose, Mannose, Mannosamin und Galactosamin, abhängig vom spezifischen Isozym. Seine Molekülmasse (~44 kDa) schließt die Polypeptidkette (33.890 Da), Hämin plus Ca²⁺ (~700 Da) und Kohlenhydrat (~9.400 Da) ein. Es existieren mindestens sieben Isozyme von HRP. Der isoelektrische Punkt von Meerrettichperoxidaseezymen liegt im Bereich von 3,0 bis 9,0.

Horseradish peroxidase (HRP) wird aus Meerrettich (Amoracia rusticana) Wurzeln isoliert und ist innerhalb der Peroxidasen der Gruppe der Ferroprotoporpyhrine zuzuordnen. HRP besteht aus einer einzelnen Polypeptidkette und entält vier Disulfidbrücken. Sie ist ein Glykoprotein mit einem Kohlenhydratanteil von 18%. Der Kohlenhydratanteil besteht aus Galactose, Arabinose, Xylose, Fucose, Mannose, Mannosamin und Galactosamin - in Mengenverhältnissen abhängig vom Isoenzym. Ihr Molekulargewicht (~44 kDa) setzt sich aus der Polypeptidkette (33,890 Daltons), dem Hemin plus Ca²⁺ (~700 Daltons) und der Glykosylierung (~9,400 Daltons) zusammen. Es existieren zumindest sieben Isoenzyme von HRP. Der isoelektrische Punkt von HRP ist in einem Bereich von pH 3 3.0 - 9.0.

Anwendung

Das Enzym wurde zur Bestimmung der H₂O₂-Erzeugung in Tabak-BY-2-Zellen mit einem spektrofluorimetrischen Verfahren verwendet.[1]

Meerrettichperoxidase (HRP) wird aus Meerrettichwurzeln (Amoracia rusticana) isoliert und gehört zur Ferroprotoporphyringruppe der Peroxidasen. Sie wird in biochemischen Anwendungen wie Western Blots, ELISA und Immunhistochemie eingesetzt. Meerrettichperoxidase wird zur Amplifikation eines schwachen Signals und zur Steigerung der Nachweisbarkeit eines Zielmoleküls, z. B. eines Proteins, verwendet. Produkt P8415, Typ XII ist ein im Wesentlichen salzfreies, lyophilisiertes Pulver. Es ist eine weiter Aufreinigung des Produkts P8375. Es wird häufig zur Bestimmung der Mengen von Glucose und Peroxiden in Lösung verwendet. Es wird für einen schnellen Empfindlichkeitsassay von Aspergillus fumigatus verwendet[2].

Peroxidase aus Meerrettich wird zur Einleitung des Peroxidase-gekoppelten Assays verwendet.[3] Sie wird außerdem zur Herstellung von β-Galactosidase(β-Gal)-Stammlösung eingesetzt.[4]

Biochem./physiol. Wirkung

HRP kann leicht mit Wasserstoffperoxid (H₂O₂) kombiniert werden, und der resultierende [HRP-H₂O₂]-Komplex kann ein breites Spektrum an Wasserstoffdonatoren oxidieren. Der optimale pH-Wert beträgt 6,0–6,5 und das Enzym ist bei einem pH-Wert im Bereich von 5,0–9,0 am stabilsten. HRP kann durch verschiedene Verfahren an Antikörper konjugiert werden, einschließlich durch Glutaraldehyd, Periodatoxidation, Disulfidbindungen und Amino- oder Thiol-gerichtete Vernetzungsmittel. Sie ist kleiner und stabiler als die Enzymmarkierungen β-Galactosidase und alkalische Phosphatase, wodurch sie die begehrteste Markierung ist. Ihre Glykosylierung führt auch zu einer geringeren nichtspezifischen Bindung.[5] Sie wird auch zum Nachweis von Glucose[6] und Peroxiden[7] in Lösung verwendet.

Wenn Meerrettichperoxidase mit einem Substrat inkubiert wird, erzeugt sie ein farbiges, fluorimetrisches oder lumineszierendes Derivat des markierten Moleküls, wodurch die Quantifizierung ermöglicht wird. Meerrettichperoxidase verringert das Maß der Hemmung in einem mutierten cydAB leicht. Bekannte Inhibitoren sind Natriumazid, Cyanid, L-Cystein, Dichromat, Ethylenthioharnstoff, Hydroxylamin, Sulfid, Vanadat, p-Aminobenzoesäure sowie die Ionen Cd²⁺, Co²⁺, Cu²⁺, Fe³⁺, Mn²⁺, Ni²⁺ und Pb²⁺.

Sonstige Hinweise

Eine weitere Aufreinigung von Peroxidase Typ VI (P8375).

Weitere Informationen über Peroxidase finden Sie unter www.sigma-aldrich.com/enzymeexplorer.

Einheitendefinition

Eine Pyrogalloleinheit bildet in 20 s bei einem pH-Wert von 6,0 und 20 °C 1 mg Purpurogallin aus Pyrogallol.

Angaben zur Herstellung

Chromatographisch aufgereinigt

Hinweis zur Analyse

Die RZ (Reinheitszahl) ist das Absorptionsratio A₄₀₃/A₂₇₅ bestimmt bei 0.5-1.0 mg/ml in deionisiertem Wasser. Es ist ein Mass für den Hämingehalt, nicht für die Enzymaktivität. Selbst Zubereitungen mit hoher RZ können eine tiefe Enzymaktivität haben.

Erste isoelektrische Fokussierungsdaten weisen darauf hin, dass dies hauptsächlich Isoenzym C ist.

Sicherheitshinweise

• Piktogramme: GHS08
• Signalwort: Danger
• H-Sätze: H334
• P-Sätze: P261 - P284 - P501
• Gefahreneinstufungen: Resp. Sens. 1
• Lagerklassenschlüssel: 11 - Combustible Solids
• WGK: WGK 1
• Persönliche Schutzausrüstung: Eyeshields, Gloves, type N95 (US)