P6140

Peroxidase

Type X, ammonium sulfate suspension

• Sinônimo(s): Doador:peróxido de hidrogênio oxidorredutase, Peroxidase de raiz forte
• Número CAS: 9003-99-0
• Número da licença da enzima: 1.11.1.7 (BRENDA, IUBMB)
• Número CE: 232-668-6
• Número MDL: MFCD00071339
• Código UNSPSC: 12352204
• eCl@ss: 32160410
• NACRES: NA.54

Propriedades

• fonte biológica: horseradish
• Nível de qualidade: 200
• tipo: Type X
• forma: ammonium sulfate suspension
• atividade específica: ≥225 units/mg protein (biuret, using pyrogallol)
• peso molecular: ~44 kDa
• concentração: ≥1.0 mg/mL
• razão de absorbância: RZ 2.5-3.5
• temperatura de armazenamento: 2-8°C
• InChI: 1S/H2O3/c1-3-2/h1-2H
• chave InChI: JSPLKZUTYZBBKA-UHFFFAOYSA-N

Descrição

Descrição geral

A peroxidase de raiz forte é isolada da raiz de Amoracia rusticana e pertence ao grupo ferroprotoporfirínico de peroxidases. A HRP é um polipeptídeo de cadeia simples com quatro pontes dissulfeto. É uma glicoproteína que contém 18% de carboidratos. A composição de carboidratos consiste em galactose, arabinose, xilose, fucose, manose, manosamina e galactosamina, dependendo da isoenzima específica. O peso molecular (~44 kDa) inclui a cadeia polipeptídica (33.890 Daltons), hemina mais Ca²⁺ (~700 Daltons) e carboidratos (~9.400 Daltons). Existem no mínimo sete isoenzimas de HRP. O ponto isoelétrico das isoenzimas de peroxidase de raiz forte varia entre 3,0 e 9,0.

Aplicação

Horseradish peroxidase (HRP) is isolated from horseradish roots (Amoracia rusticana). It is used in biochemistry applications such as western blots, ELISA and Immunohistochemistry. Horseradish peroxidase is used to amplify a weak signal and increase detectability of a target molecule, such as a protein[1]. Product P6140 has been used to detect low density lipoprotein (LDL)[2].

The enzyme from Sigma has been used while assessing the skin sensitization potential of pro-haptens.[3] It has also been used to show that peroxidase (PO) activity and its heat stability correlate with the availability of free Ca²⁺ ions.[4]

Ações bioquímicas/fisiológicas

HRP readily combines with hydrogen peroxide (H₂O₂) and the resultant [HRP-H₂O₂] complex can oxidize a wide variety of hydrogen donors. The optimal pH is 6.0-6.5 and the enzyme is most stable in the pH range of 5.0-9.0. HRP can be conjugated to antibodies by several different methods that include the use of glutaraldehyde, periodate oxidation, disulfide bonds, and also via amino- and thiol-directed cross-linkers. It is smaller and more stable than the enzyme labels, β-galactosidase and alkaline phosphatase. Hence, it is the most desired label. Also, its glycosylation leads to lower non-specific binding.[5] It is also used for the determination of glucose[6] and peroxides[7] in solution. Sodium azide, cyanide, L-cystine, dichromate, ethylenethiourea, hydroxylamine, sulfide, vanadate, p-aminobenzoic acid, and Cd²⁺, Co²⁺, Cu²⁺, Fe³⁺, Mn²⁺, Ni²⁺, Pb²⁺ ions are found to inhibit its enzyme activity.[8]

When incubated with a substrate, horseradish peroxidase produces a coloured, fluorimetric, or luminescent derivative of the labeled molecule, allowing quantification[1]. Horseradish peroxidase has been shown to slightly reduce the level of inhibition in a cydAB mutant[9].

Definição da unidade

Uma unidade de pirogalol forma 1,0 mg de purpurogalina a partir do pirogalol em 20 segundos em pH 6,0 a 20 °C.

forma física

Crystalline suspension in 3.2 M (NH₄)₂SO₄ solution containing potassium phosphate buffer, pH 6.0

Nota de preparo

Water may be used to dilute suspension if needed.

Nota de análise

RZ (Reinheitszahl) é a taxa de absorbância A₄₀₃/A₂₇₅ determinada a 0,5-1,0 mg/ml em água deionizada. É uma medida do teor de hemina, e não da atividade enzimática. Mesmo preparações com RZ alto podem ter atividade enzimática baixa.

Preliminary studies indicate the presence of two basic and no acidic isoenzymes

Outras notas

Veja mais informações sobre peroxidase em www.sigma-aldrich.com/enzymeexplorer.

Informações de segurança

• Pictogramas: GHS08
• Palavra indicadora: Danger
• Frases de perigo: H334
• Declarações de precaução: P261 - P284 - P501
• Classificações de perigo: Resp. Sens. 1
• Código de classe de armazenamento: 11 - Combustible Solids
• Classe de risco de água (WGK): WGK 1
• Equipamento de proteção individual: Eyeshields, Gloves, type N95 (US)