KCQS01
KiCqStart® SYBR® Green qPCR-Fertigmix™
Low ROX™, for ABI and Stratagene instruments
Synonym(e):
qPCR master mix, sybr green qPCR
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Über diesen Artikel
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form
liquid
usage
sufficient for 1250 reactions, sufficient for 250 reactions, sufficient for 5000 reactions
feature
dNTPs included, hotstart
storage condition
protect from light
technique(s)
RT-qPCR: suitable, qPCR: suitable
color
colorless
input
purified DNA
crude DNA
compatibility
for use with ABI 7500 Fast, for use with ABI 7500, for use with ABI ViiA 7, for use with Agilent AriaMx, for use with Douglas Scientific IntelliQube, for use with Qiagen Rotor-Gene Q, for use with QuantStudio™, for use with Strategene Mx3000P, for use with Strategene Mx3005P, for use with Strategene Mx4000
detection method
SYBR® Green
shipped in
dry ice
storage temp.
−20°C
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|---|---|---|---|
| technique(s) qPCR: suitable | technique(s) qPCR: suitable | technique(s) qPCR: suitable | technique(s) qPCR: suitable |
| form liquid | form liquid | form liquid | form liquid |
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| storage condition protect from light | storage condition protect from light | storage condition protect from light | storage condition protect from light |
| color colorless | color colorless | color colorless | color light blue |
General description
Eine hochspezifische Amplifikation ist für eine erfolgreiche qPCR mit SYBR Green I-Färbetechnologie unerlässlich, da dieser Farbstoff an alle während der Amplifikation erzeugten dsDNA-Moleküle bindet und diese nachweist. Hot-Start-Taq-DNA-Polymerase ist Antikörper-vermittelt und somit vor dem anfänglichen PCR-Denaturierungsschritt inaktiv.
Application
- Zur Amplifikation und Quantifizierung von DNA in Echtzeit-PCR(qPCR)-Assays[1][2]
- bei der Amplifikation und Quantifizierung von Transkripten bei der zweistufigen quantitativen Reverse-Transkriptase-Polymerase-Kettenreaktion (qRT-PCR)[3][4]
- bei der Amplifikation von komplementärer DNA (cDNA) durch Echtzeit-PCR(qPCR)-Assay[5]
- Genexpressionen
- DNA-Quantifizierung
- CHiP
Features and Benefits
- Assay-Ergebnisse in nur 33 Minuten
- Hocheffiziente und empfindliche Echtzeit-PCR-Ergebnisse
- Wenig bis keine Optimierung erforderlich
Analysis Note
Other Notes
Verpackung:
250 Reaktionen* = 2 X 1,25-mL-Röhrchen
1250 Reaktionen* = 10 X 1,25-mL-Röhrchen
5000 Reaktionen* = 1 X 50-mL-Röhrchen
* Anzahl der Reaktionen auf Grundlage eines Volumens von 20 μL
KiCqStart SYBR Green qPCR-Fertigmix ist bei lichtgeschützter Lagerung in einem Gefrierschrank mit konstanter Temperatur bei -20 °C 1 Jahr lang stabil. Zur bequemeren Nutzung kann der Mix ungefroren bis zu 6 Monate bei +2 bis +8 °C aufbewahrt werden. Nach dem Auftauen die Bestandteile vor der Verwendung gründlich mischen. Wiederholtes Einfrieren und Auftauen wird nicht empfohlen. Nichtsdestotrotz zeigte das Produkt nach 20 Einfrier-/Auftauzyklen bzw. 2 Monaten Lagerung bei +20 °C keinen Leistungsverlust.
Legal Information
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Lagerklasse
12 - Non Combustible Liquids
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WGK 3
flash_point_f
Not applicable
flash_point_c
Not applicable
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Artikel
Der PCR-Assay-Leitfaden führt Sie durch die Primer-Validierung und andere Faktoren der Assay-Optimierung, um eine hohe Sensitivität und Spezifität für eine optimale DNA/RNA-Quantifizierung zu gewährleisten.
Die Polymerase-Kettenreaktion ist eine der am häufigsten verwendeten Techniken in der Molekularbiologie. Der PCR-Prozess besteht aus drei Hauptschritten: Denaturierung, Hybridisierung und Elongation
Nach Abschluss einer herkömmlichen PCR erfolgt die Analyse der PCR/qPCR-Daten durch Auflösung in einem Agarosegel oder aktueller durch eine Kapillare.
Die Polymerase-Kettenreaktion in Echtzeit ermöglicht es Forschern, die Menge des Ausgangsmaterials in einer Probe einzuschätzen. Sie verfügt über einen viel größeren dynamischen Analysebereich als die herkömmliche PCR.
Protokolle
Bei der Gradienten-PCR zur Assay-Optimierung wird die optimale Hybridisierungstemperatur (Ta) der Primer bestimmt, indem identische Reaktionen mit einer feststehenden Primer-Konzentration in einem ganzen Hybridisierungstemperaturen-Bereich getestet werden.
Die Optimierung der qPCR-Bedingungen ist wichtig für die Entwicklung eines robusten Assays. Die beiden wichtigsten Ansätze sind die Optimierung der Primerkonzentration und/oder der Hybridisierungstemperaturen.
Die Analyse von Genexpressionsdaten erfordert eine stabile Referenz- oder Ladekontrolle. Diese Referenz besteht in der Regel aus einem oder mehreren Referenzgenen.
Unser SYBR Green qPCR-Protokoll ist eine Methode zum Nachweis einer genauen Quantifizierung der Genexpression und der RT-PCR-Reaktionen.
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In der RT-qPCR oder quantitativen PCR mit reverser Transkription werden die Effekte der reversen Transkription und der quantitativen PCR oder Echtzeit-PCR für die Amplifikation und den Nachweis spezifischer Ziele kombiniert. Die RT-qPCR wird in vielen Anwendungen eingesetzt, darunter die Quantifizierung der Genexpressionsniveaus, die Validierung der RNA-Interferenz (RNAi) und der Nachweis von Krankheitserregern wie Viren.
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