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  • Evaluation of the sensitivity, responsiveness and reproducibility of primary rainbow trout hepatocyte vitellogenin expression as a screening assay for estrogen mimics.

Evaluation of the sensitivity, responsiveness and reproducibility of primary rainbow trout hepatocyte vitellogenin expression as a screening assay for estrogen mimics.

Aquatic toxicology (Amsterdam, Netherlands) (2015-01-07)
Maria T Hultman, Jan Thomas Rundberget, Knut Erik Tollefsen
要旨

Vitellogenin (Vtg) induction in primary fish hepatocytes has been proposed as an in vitro screening assay for ER agonists and antagonists, but has not yet been used extensively as a high-throughput screening tool due to poor reproducibility, sensitivity and overall feasibility. The present work has evaluated the role of seasonal variation, normalization, optimal culture and assay conditions on the sensitivity, responsiveness and reproducibility of in vitro vtg gene mRNA and protein expression in rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) primary hepatocytes using the xenoestrogen 17α-ethynylestradiol (EE2) as a test chemical. The results show that primary hepatocytes display a relatively high individual and seasonal variation in both Vtg mRNA and protein induction potential, although less variance was observed in assay sensitivity. Data normalization of assay response to maximum (3 nM EE2) and minimum (DMSO) Vtg production dramatically reduced this variance and led to improved assay reproducibility. A time-dependent response was observed both for mRNA and protein expression, reaching maximum Vtg induction after 96 h of exposure, although reproducible concentration response curves for both Vtg mRNA and protein could be obtained already after 48 h. A need for chemical re-exposure of the hepatocytes was identified to be important for sustaining exposure concentrations in extended studies (>48 h), whereas different plate formats (96, 24 or 6 wells) did not affect the bioassay performance. In conclusion, standardization of hepatocyte bioassay and test conditions as well as data-normalization procedures are proposed to be instrumental for more consistent and comparable results in future use of this in vitro assay.

材料
製品番号
ブランド
製品内容

Sigma-Aldrich
メタノール, suitable for HPLC, ≥99.9%
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Sigma-Aldrich
アセトン, ACS reagent, ≥99.5%
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Sigma-Aldrich
メタノール, ACS reagent, ≥99.8%
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Sigma-Aldrich
アセトン, suitable for HPLC, ≥99.9%
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Sigma-Aldrich
メタノール, suitable for HPLC, gradient grade, ≥99.9%
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Sigma-Aldrich
アセトン, HPLC Plus, for HPLC, GC, and residue analysis, ≥99.9%
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Sigma-Aldrich
トルエン, ACS reagent, ≥99.5%
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Sigma-Aldrich
重炭酸ナトリウム, ACS reagent, ≥99.7%
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Sigma-Aldrich
メタノール, HPLC Plus, ≥99.9%
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Sigma-Aldrich
炭酸ナトリウム, powder, ≥99.5%, ACS reagent
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Sigma-Aldrich
トルエン, suitable for HPLC, 99.9%
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Sigma-Aldrich
トルエン, HPLC Plus, for HPLC, GC, and residue analysis, ≥99.9%
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Sigma-Aldrich
重炭酸ナトリウム, powder, BioReagent, for molecular biology, suitable for cell culture, suitable for insect cell culture
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Sigma-Aldrich
アセトン, Laboratory Reagent, ≥99.5%
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Sigma-Aldrich
酢酸アンモニウム, ACS reagent, ≥97%
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Sigma-Aldrich
炭酸ナトリウム, ACS reagent, anhydrous, ≥99.5%, powder or granules
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Sigma-Aldrich
重炭酸ナトリウム, ReagentPlus®, ≥99.5%, powder
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Sigma-Aldrich
酢酸アンモニウム, ≥99.99% trace metals basis
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Sigma-Aldrich
硫酸銅(II), ReagentPlus®, ≥99%
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Sigma-Aldrich
メタノール, suitable for HPLC, gradient grade, suitable as ACS-grade LC reagent, ≥99.9%
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Sigma-Aldrich
メタノール, puriss. p.a., ACS reagent, reag. ISO, reag. Ph. Eur., ≥99.8% (GC)
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Sigma-Aldrich
トルエン, puriss. p.a., ACS reagent, reag. ISO, reag. Ph. Eur., ≥99.7% (GC)
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Sigma-Aldrich
アセトン, puriss. p.a., ACS reagent, reag. ISO, reag. Ph. Eur., ≥99.5% (GC)
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Sigma-Aldrich
炭酸ナトリウム, ACS reagent (primary standard), anhydrous, 99.95-100.05% dry basis
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Sigma-Aldrich
メタノール, Laboratory Reagent, ≥99.6%
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Sigma-Aldrich
ダンシルクロリド, BioReagent, suitable for amino acid labeling, powder and chunks, ≥99% (HPLC)
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Sigma-Aldrich
重炭酸ナトリウム, anhydrous, free-flowing, Redi-Dri, ACS reagent, ≥99.7%
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Sigma-Aldrich
炭酸ナトリウム, ReagentPlus®, ≥99.5%
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Sigma-Aldrich
アセトン, suitable for HPLC, ≥99.8%
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Sigma-Aldrich
酢酸アンモニウム, for molecular biology, ≥98%
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