Hogyan dolgozzunk az ammónium-szulfát szuszpenzióként szállított enzimekkel?

- Ha az ammónium-szulfát zavarhatja a reakció(ka)t:

1. Vegye ki az enzimet a hűtőszekrényből. Megjegyzés: Erősen javasoljuk, hogy az ammónium-szulfát szuszpenziókat nem fagyassza le.
2. Vigyázzon, hogy a kupak szorosan zárva legyen, majd fordítsa meg többször az injekciós üveget/flakont, hogy tejszerű szuszpenziót kapjon. Ez körülbelül egy percet vehet igénybe. Ne vortexeljen vagy szonikáljon; az ilyen durva kezelés az enzim egy részét denaturálhatja.
3. Pipetta és steril, szélesfuratú pipettahegy segítségével távolítsa el a szuszpenzió egy részét.
4. Visszük át egy tiszta mikrocentrifugacsőbe (vagy centrifugacsőbe, ha nagyobb mennyiségben dolgozunk).
5. Pelletáljuk az enzimet körülbelül 10 000-15 000 x g-nél 10 percig tartó centrifugálással. Ha rendelkezésre áll, használjon 2 °C és 8 °C közötti hőmérsékletre beállított, hűtött mikrocentrifugát.
6. Gondosan távolítsa el a lehető legtöbb tiszta felülúszót; tartsa meg. Nem szükséges az ammónium-szulfát-oldat teljes egészét eltávolítani.
7. A pelletet megfelelő mennyiségű reakciópuffer hozzáadásával oldjuk fel.
8. Vizsgáljuk meg a felülúszót és a pelletből származó oldatot fehérjetartalom és/vagy enzimaktivitás szempontjából.

- Ha az ammónium-szulfát nem zavarja a reakció(ka)t:

1. A fenti 1-3. lépés szerint.
2. Adjuk ezt a részt közvetlenül a reakciópufferhez.

Megjegyezzük, hogy ammónium-szulfát szuszpenzió esetén az enzim nagy része szilárd formában lesz. Valószínű, hogy az ammónium-szulfát oldatban csak elhanyagolható mennyiségű enzim lesz.