Vírusvektor Downstream feldolgozás
A vírusvektorok tisztítási folyamatai történelmileg a monoklonális antitestekhez használt rendszereken alapultak, amelyeket nem a szükséges szintű visszanyerésre terveztek.
A kifejezetten génterápiás vírusvektorok downstream feldolgozására tervezett új technológiák bevezetése lehetőséget kínál a hozam és az áteresztőképesség növelésére. A vírusvektorok downstream feldolgozásának optimalizálására felhasználható megközelítések közé tartoznak a következők:
- Ultrafiltration/diafiltration Ultrafiltration/diafiltration műveletek, különösen az érintőleges áramlású szűrés (TFF) alkalmazásával a sejt- vagy vírusszűrés és -tisztítás, a későbbi fehérjekoncentrálás és diafiltráció, valamint a végső formulázás során
- Intenzívebb kromatográfiás eljárások, amelyek csökkentik az egységnyi művelet számát és méretét, olyan technológiák segítségével, mint például a nagy termelékenységű, egyszer használatos kromatográfiás membránadszorberek
Ezek a downstream technológiák lehetővé teszik a vírusvektorok tisztítási idejének órákról percekre történő csökkentését, miközben javítják a visszanyerést. Emellett megkönnyíthetik a méretnövelést, csökkenthetik a folyamat lábnyomát, és hatékonyabb létesítménykihasználást tesznek lehetővé.
Kapcsolódó műszaki cikkek
- Our overview of scalable tangential flow filtration for viral vector production will provide key considerations for developing and optimizing your downstream process.
- Benzonase®endonuclease efficiently removes nucleic acid contaminants from viral production, crucial for cell and gene therapies and vaccines.
- Explore strategies for separating empty and filled capsids in viral vector production. Learn about upstream strategies and how trends in AAV capsid design impact purification.
További cikkek keresése
Első tisztítás
A vírusvektorokat tartalmazó nyers közeg mélyszűrése vagy a centrifugálás és a mélyszűrés kombinációja a nagy sejttörmelék és egyéb szennyeződések eltávolítása érdekében.
Második tisztítás
Az elsődleges tisztításból származó tisztított közeget további lépésekkel tovább tisztítják.
Ultrafiltráció/Diafiltráció
A koncentrációra és a puffercserére a kontrasztanyagot ultrafiltrálják, illetve diafiltrálják. A vírusvektort méretalapú szűréssel választják el a szennyeződésektől. A diafiltráció eltávolítja a sót és más molekulákat, és a választott pufferrel cseréli ki.
Kromatográfia
A vírusvektor tisztítására legalább két kromatográfiás módszert alkalmaznak, köztük az ioncserét, az affinitást és a méretkizárást.
Vírusszűrés
A megtisztított vírusvektort 15 nanométeres pórusú nanoszűrésnek vetik alá a járulékos vírusok, endotoxinok és minden egyéb fennmaradó szennyeződés és aggregátum eltávolítása érdekében.
Szteril szűrés
A steril szűrés vagy a biológiai terheltség csökkentése többször is alkalmazható a folyamatban. A tápáramot 0,4 vagy 0,2 mikronos sterilizáló minőségű szűrőn vezetik át a feldolgozás során behurcolt baktériumok és egyéb mikroorganizmusok eltávolítása érdekében.
Finális feltöltés
A megtisztított és steril vírusvektort a végső tervezett tartályba töltik. Itt gondosan meg kell fontolni a formulát, a csomagolóanyagokat, a tárolási körülményeket a stabilitás és az integritás biztosítása érdekében.
Kapcsolódó források
- Shear ignorance? Think again: Breaking the perception of shear within viral vector manufacturing
This podcast transcript discusses best practices – and common misconceptions – when establishing process conditions and utilizing different TFF device formats.
- Pellicon® Capsules versus Hollow Fibers for Ultrafiltration/Diafiltration (UF/DF) in Viral Gene Therapy Manufacturing
This application note discusses methodology and experimental results in the performance evaluation of Pellicon® Capsules versus hollow fibers for UF/DF of viral vectors and describes the impact of either filter type on a TFF process.
- /deepweb/assets/sigmaaldrich/marketing/global/documents/352/641/pellicon-capsule-aav-ot11666en-ms.pdf
Part of the linearly scalable Pellicon® family of TFF filters, single-use Pellicon® Capsules and scale-down Pellicon® XL 50 cassettes provide reliability and reproducibility at any stage of your AAV process, from development to manufacturing
- /deepweb/assets/sigmaaldrich/marketing/global/documents/987/212/pellicon-capsule-vgt-tb11669en-ms.pdf
In this technical brief, we discuss use of our new single-use technology for tangential flow filtration (TFF) of viral vectors during the evaluation of two TFF operating control strategies.
- /deepweb/assets/sigmaaldrich/marketing/global/documents/407/540/podcast-empty-full-separation-ot9653en-ms.pdf
This article explains the need for a more nuanced understanding of AAV capture and empty–full separation, and the trends driving innovation in this area.
Munkafolyamat
Vírusvektor Upstream feldolgozás
A helyes upstream folyamatra vonatkozó döntések meghozatala nemcsak a vírusvektor titerére, hanem a downstream folyamatokra, az időzítésre és a hatósági elfogadásra is hatással van
Vírusvektor formulázása és végleges feltöltése
A kereskedelmi szempontból életképes génterápia kialakítása magas szintű alkalmazási és szabályozási szakértelmet igényel
Vírusvektorok jellemzése és biológiai biztonságossági vizsgálatok
A vírusvektor termékek kritikus biológiai biztonságossági vizsgálata és jellemzése segíthet a kulcsfontosságú minőségi jellemzők teljes körű elemzésében: azonosság, hatékonyság, biztonságosság és stabilitás
Vírusvektorok szerződéses fejlesztése és gyártása
A CDMO partnerségek kritikus szerepet játszanak a klinikai csővezetékek fejlesztésében és a sikeres kereskedelmi forgalomba hozatal elérésében
Az olvasás folytatásához jelentkezzen be vagy hozzon létre egy felhasználói fiókot.
Még nem rendelkezik fiókkal?