Nízkotlaká kapalinová chromatografie

Adsorpční chromatografie

Adsorpční chromatografie, známá také jako chromatografie kapalina - pevná látka, uchovává chemické látky jejich adsorpcí a desorpcí na povrchu nosné, stacionární fáze. Adsorbent tvoří stacionární fázi a rozpuštěná látka se na něj váže pomocí van der Waalových sil a sterických interakcí. Protože adsorpční místa jsou obvykle na vnějším povrchu stacionární fáze, používají se jako stacionární fáze relativně malé částice. Běžně používanými adsorbenty jsou oxid křemičitý, oxid hlinitý, dřevěné uhlí, florisil, polyamidy, celit a diatomit.

Dělicí chromatografie

Dělicí chromatografie rozděluje složky rozdělením mezi dvě nemísitelné kapaliny. Jednou z nich je kapalná mobilní fáze, zatímco druhou je kapalina držená stacionárně na pevném nosiči. Mezi materiály používané jako pevný nosič patří silikagel, diatomitová zemina, celulóza, polytetrafluorethylen (PTFE) a polystyren. Inertní pevný nosič poskytuje velkou plochu povrchu pro kapalnou stacionární fázi.

Afinitní chromatografie

Afinitní chromatografie odděluje složky pomocí selektivních a reverzibilních interakcí, například dvojice protilátka-antigen, enzym-substrát nebo hormon-receptor, přičemž stacionární fází je jedna z interagujících látek. Afinitní ligand je interagující látka imobilizovaná na pevném nosiči, jako jsou akrylové kuličky, agaróza a pryskyřice Toyopearl, a slouží jako stacionární fáze pro afinitní kolonu.

Chromatografie s gelovou filtrací

Známá také jako chromatografie s vyloučením velikosti, odděluje molekuly různých velikostí, například proteiny různých velikostí a oligomerních forem. Stacionární fází je pryskyřice tvořená zesíťovanou matricí kuliček, která obsahuje póry určité velikosti. Kolony pro gelovou filtraci obsahují kuličky polyakrylamidu, agarózy, dextranu nebo směsi těchto látek. Izoluje menší analyty tím, že poskytuje částečný nebo úplný přístup k objemu pórů uvnitř částic obalujících kolonu.

Chromatografie hydrofobních interakcí (HIC)

Chromatografie hydrofobních interakcí (HIC) separuje biomolekuly na základě rozdílů v jejich povrchové hydrofobicitě. Je založena na interakci nepolárních hydrofobních skupin navázaných na pryskyřici kolony, jako je butyl, oktyl nebo fenyl, s hydrofobními skupinami na biomolekulách. Široce se používá k separaci proteinů při zachování jejich biologické aktivity, protože používá méně denaturační podmínky a matrice.

Iontově výměnná chromatografie (IEX)

Iontově výměnná chromatografie separuje molekuly na základě rozdílů v jejich čistých povrchových nábojích. Na povrch matrice, jako je celulóza, oxid křemičitý nebo styren-divinylbenzen, jsou kovalentně vázány nabité funkční skupiny. Iontově výměnné skupiny imobilizované v pryskyřici interagují s molekulami, které mají opačné náboje. V kationtově výměnné chromatografii se kladně nabité látky v mobilní fázi vážou na záporně nabitou iontoměničovou pryskyřici. Při aniontově výměnné chromatografii se záporně nabité látky v mobilní fázi vážou na kladné náboje na iontoměničové pryskyřici.

Nízkotlaký kapalinový chromatografický systém

Nízkotlaký kapalinový chromatografický systém (LPLC) se obvykle skládá z kolony naplněné stacionární fází pro separaci, čerpadla, které dodává mobilní fázi přes kolonu řízeným průtokem, a detektoru pro měření eluentu při výstupu z kolony.
Systémy LPLC jsou také vybaveny vstřikovacím systémem pro zavedení vzorku do proudu mobilní fáze, který zajišťuje přesné a reprodukovatelné zavedení vzorku. Některá nastavení obsahují sběrač frakcí, který shromažďuje separované složky pro další analýzu.