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Determinação de Triclosan em águas ambientais
Usando limpeza polimérica de SPE e HPLC com detecção espectrométrica de massa

Olga Shimelis, Michael Halpenny, Ken Espenschied, Kristen Schultz

Reporter US Volume 32.2

Introdução

Triclosan é um produto químico que tem sido usado como agente antibacteriano em muitos sabonetes e em uma variedade de outros produtos de consumo e cuidados pessoais há muitos anos. Devido a seu amplo uso e alto volume de produção (excedendo 1 milhão de libras por ano com base em uma avaliação da EPA dos EUA em 1998), a FDA dos EUA está envolvido na “análise científica e regulatória desse ingrediente” [1]. Em 2003-2004, os Centros de Controle de Doenças dos EUA detectaram a substância química na urina de 75% das pessoas testadas [2]. Estudos recentes em animais mostraram que Triclosan é um potencial disruptor endócrino. Com relação ao impacto de Triclosan no meio ambiente, programas de monitoramento encontraram o produto químico em muitos córregos testados, onde é introduzido por meio da descarga de estações de tratamento de águas residuais[3]. Triclosan foi incluído no Método EPA 1694 desenvolvido para a medição de produtos farmacêuticos e de cuidados pessoais por LC/MS/MS [4].

Neste estudo, Triclosan foi detectado nas amostras ambientais da água local usando SPE polimérico Supel™ -Select HLB para limpeza e uma coluna de HPLC Ascentis^® Express C18 para detecção.

Experimental

As amostras de água foram coletadas da descarga da estação de tratamento de águas residuais local. As amostras também foram coletadas do riacho, a cerca de 400 metros abaixo do local da descarga.

O método foi desenvolvido adaptando o padrão EPA 1694 para análise de Triclosan usando os cartuchos Supel-Select HLB SPE (Nº do cat. 54182-U). As modificações no método 1694 incluíram a introdução de um solvente de eluição alternativo -- acetonitrila:metanol 1:1. Foi mais adequado para a eluição do analito do cartucho HLB. O volume de carregamento da amostra foi reduzido de 500 ml para 50 ml, e o volume de eluição foi reduzido para 3 ml, em vez de 6 ml usados no método padrão. A metodologia final para detecção de Triclosan é apresentada na Figura 1.

Ambos os métodos de detecção UV e MS/MS foram testados para as amostras de água ambiental. A maior concentração de Triclosan no eluente da estação de tratamento de águas residuais permitiu sua detecção por UV, enquanto a menor concentração de Triclosan no fluxo exigiu a detecção por MS/MS para uma quantificação precisa. O método HPLC foi desenvolvido usando a coluna de HPLC Ascentis Express C18. A tecnologia Fused-Core^® proporcionou uma boa resolução do pico de Triclosan em relação aos picos de fundo nas amostras, resultando em picos mais nítidos e limites mais baixos de detecção de Triclosan. As colunas Ascentis Express permitiram que a separação fosse executada em baixa contrapressão usando instrumentos de HPLC existentes (foram usadas as pilhas Agilent^® 1200 e Agilent 1100).

Figura 1.Método de preparação de amostras para análise de amostras de água para Triclosan usando Supel-Select HLB SPE 60 mg/3 ml (54182-U).

Resultados

A Figura 2 mostra os cromatogramas UV resultantes de amostras de água.
A Figura 3 mostra os cromatogramas MS/MS para as mesmas amostras de água.

Figura 2.Cromatogramas UV de Triclosan em água a 280 nm.

CONDIÇÕES: coluna: Ascentis Express C18, 15 cm x 2,1 mm de DI, 2,7 µm (53825-U); fase móvel: 40% de metanol, 40% de acetonitrila, 20% de fosfato de potássio tribásico, pH 2,5; vazão: 0,150 ml/min.; temperatura: 30 °C; detector: UV 280 nm; pressão da coluna: 112 bar; injeção: 10,0 µL; instrumento: Agilent 1200, série HPLC-UV

Figura 3.Cromatogramas LC/MS/MS de Triclosan em água.

CONDIÇÕES: coluna: Ascentis Express C18, 15 cm x 2,1 mm de DI, 2,7 µm (53825-U);fase móvel: 40% metanol, 40% acetonitrila, 20% de ácido fórmico a 0,1% aquoso ;vazão: 0,150 ml/min; temp.: 30 °C; detector: Q1/Q3 286,8/35,0 ESI negativo; injeção: 10,0 µL;instrumento: Agilent 1100/1200 HPLC e AB SCIEX QTRAP^® 3200

Discussão

O limite de detecção de Triclosan pelo método UV foi estimado em 100 ng/l ao usar 50 ml de amostra de água de carregamento. O método EPA 1694 especificou o limite de detecção para Triclosan como 94 ng/l usando 500 ml de volume de carga SPE e detecção MS/MS. O uso da coluna Ascentis Express resultou em picos mais nítidos e permitiu que o baixo limite de detecção fosse atingido usando uma técnica de detecção UV menos sensível.

A concentração de Triclosan na amostra da estação de tratamento de águas residuais foi considerada alta, cerca de 1000 ng/l. Essa concentração foi facilmente detectável pelo método UV. O método MS/MS confirmou que o método UV forneceu o resultado correto da concentração.

Nas amostras coletadas 400 metros rio abaixo, os níveis de Triclosan foram ainda mais diluídos pela água do riacho, produzindo resultados abaixo dos limites de detecção do método UV. A metodologia MS/MS permitiu a detecção de Triclosan no riacho abaixo da descarga da estação de tratamento de águas residuais. O limite de detecção de Triclosan pelo método MS/ MS foi estimado em 50 ng/l ao usar 50 ml de amostra de água.

Conclusões

Foi desenvolvido um método para detecção de Triclosan em amostras ambientais de água usando a limpeza com Supel Select SPE e o conveniente volume de amostra de carregamento de 50 ml. Uma coluna de HPLC Ascentis Express C18 de núcleo fundido permitiu picos mais nítidos, limites de detecção mais baixos com baixa contrapressão e foi usada em sistemas de HPLC existentes. Triclosan foi detectado na descarga da estação de tratamento de águas residuais pelos métodos UV e MS/MS em cerca de 1000 ng/l. Triclosan estava presente na água do riacho a 63 ng/l e, nesse nível, exigiu a detecção de MS/MS.

Referências

http://www.fda.gov/forconsumers/consumerupdates/ucm205999.htm
http://www.dailyfinance.com/2010/04/09/fda-epa-to-review-safety-ofcommon-antibacterial-ingredient/
http://www.epa.gov/oppsrrd1/REDs/factsheets/triclosan_fs.htm
Método US EPA 1694, “Produtos farmacêuticos e de higiene pessoal em água, solo, sedimentos e biossólidos por HPLC/MS/MS” http://water.epa.gov/scitech/methods/cwa/bioindicators/upload/2008_01_03_methods_method_1694.pdf

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