Dlaczego warto stosować antybiotyki w hodowli komórkowej?
Stosowanie antybiotyków w hodowli komórkowej minimalizuje utratę cennych komórek, odczynników, czasu i wysiłku z powodu zanieczyszczenia. Utrzymanie aseptycznych warunków i technik ma kluczowe znaczenie dla laboratorium badawczego zajmującego się hodowlą komórek/tkanek. Doświadczeni badacze zalecają stosowanie antybiotyków przetestowanych w hodowli komórkowej, w odpowiednich stężeniach, podczas hodowli komórek. Praktyka ta chroni komórki, zapobiegając zanieczyszczeniu, które wywołuje zmiany morfologiczne lub fizjologiczne. Oprócz zapobiegania zanieczyszczeniom, niektóre antybiotyki działają również jako środki selekcyjne, stosowane do selekcji i tworzenia transfekowanych / genetycznie zmodyfikowanych komórek do celów badawczych.
- Skażenie bakteryjne i grzybicze
- Zakażenie mykoplazmą
- Zakażenie wirusowe
- .Kiedy należy stosować antybiotyki w hodowli komórkowej
Zanieczyszczenie bakteryjne i grzybicze
Zanieczyszczenia bakteryjne i grzybicze są najbardziej widoczne w hodowli komórkowej ze względu na szybką kolonizację we wzbogaconych pożywkach. Pożywka staje się mętna i zmienia kolor (zmiana pH) w ciągu kilku godzin/dni od zanieczyszczenia. Regularne obserwacje mikroskopowe i dodawanie antybiotyków do pożywki zapobiega rozprzestrzenianiu się zanieczyszczeń w kulturach (patrz tabela poniżej).
Wybierz odpowiednie antybiotyki dla swoich komórek.
Określ odpowiednie stężenie antybiotyku dla komórek.
Zanieczyszczenie mykoplazmą
Mycoplazmy są najmniejszymi, wolno żyjącymi (0.3 µM) prokarionty obserwowane pod skaningowym mikroskopem elektronowym jako formy nitkowate lub kokosowe. Zanieczyszczenie mykoplazmami jest tajemnicze i niezwykle trudne w obsłudze. Są niewykrywalne pod mikroskopem świetlnym, ale powodują zmiany morfologiczne, aberracje chromosomowe oraz zmieniony metabolizm aminokwasów i kwasów nukleinowych. Ze względu na brak ściany komórkowej są oporne na rutynowo stosowane antybiotyki. Chociaż konkretne antybiotyki są skuteczne, najlepsze środki przeciwko mykoplazmie okazały się kombinacją wielu czynników biologicznych.
Najlepszym sposobem zapobiegania skażeniu mykoplazmą jest stosowanie linii komórkowych z ECACC które są regularnie testowane pod kątem skażenia mykoplazmą.
Skażenie wirusowe
Wirusy są najtrudniejszymi do wykrycia zanieczyszczeniami w hodowli komórkowej i są trudne do usunięcia. Zanieczyszczenie jest jednak samoograniczające się, ponieważ wirusy są wyłącznie zależne od maszyn komórkowych gospodarza. Zakażone wirusem komórki stanowią zagrożenie dla zdrowia personelu laboratoryjnego. Stosowanie surowicy przebadanej pod kątem BVDV znacznie obniża ryzyko zakażenia wirusami.
.Kiedy należy stosować antybiotyki w hodowlach komórkowych
- Antybiotyki zabezpieczają zapasy o wysokiej wartości niezastąpionych kultur i do produkcji zapasów roboczych. Gdy powtarzalne wyniki są krytyczne, zaleca się dodanie do hodowli optymalnych stężeń odpowiednich antybiotyków.
- Antybiotyki takie jak Penicillin-Streptomycin roztwór w stężeniu 50-100 I.U./ml jest zalecany do pierwotnej hodowli komórkowej, ponieważ ryzyko zanieczyszczenia jest wysokie przez pierwsze kilka tygodni.Antybiotyki zapewniają dodatkową warstwę ochrony przed czynnikami takimi jak nowi badacze w trakcie szkolenia, cząstki stałe i aerozole.
- Antybiotyki są również używane do selekcji komórek zmodyfikowanych przez inżynierię genetyczną (środki selekcyjne). Puromycyna oraz hygromycyna B są używane do selekcji i tworzenia komórek wyrażających odpowiednio geny oporności na puromycynę i oporności na higromycynę.
Błędem jest zakładanie, że antybiotyki są całkowicie szkodliwe dla hodowli komórkowej; prawidłowym podejściem jest stosowanie optymalnego stężenia w eksperymentach hodowli komórkowej, aby zapobiec zanieczyszczeniu i chronić komórki w laboratorium.
Kliknij aby zapoznać się z całą naszą ofertą antybiotyków do użytku badawczego.
Kliknij aby zapoznać się z całą naszą ofertą hodowli komórkowych do celów badawczych.
Zaloguj się lub utwórz konto, aby kontynuować.
Nie masz konta użytkownika?