Białka macierzy zewnątrzkomórkowej i narzędzia do optymalizacji hodowli komórkowej

• Co to jest macierz zewnątrzkomórkowa (ECM)?
• Białka ECM: Laminina, Fibronektyna, Kolagen, Żelatyna, Witronektyna
• Powłoki chemiczne i syntetyczne: Poly-Lysine i Poly-Ornithine
• Pre-Mixed Attachment Factor Solutions
• Powlekane paski i płytki do adhezji komórek
• Inne białka ECM w hodowli komórkowej

Co to jest macierz pozakomórkowa (ECM)?

Komórki zwierzęce i techniki hodowli tkanek są stale ulepszane w celu optymalizacji warunków hodowli komórek w warunkach in vitro. Powłoki białkowe macierzy zewnątrzkomórkowej (ECM), chemiczna lub fizyczna modyfikacja naczynia do hodowli komórkowej, okazały się skutecznymi metodami lepszego naśladowania zachowania komórek in vivo .

W 1900 roku tkanki zwierzęce hodowano na szklanych powierzchniach, ale ponieważ wymagają one starannych procedur czyszczenia, naukowcy zaczęli eksperymentować z jednorazowymi plastikowymi naczyniami do hodowli wykonanymi z polistyrenu.^1,2 Jednak plastikowe naczynia hodowlane mają pewne ograniczenia:³

• Trudności we wzroście i przyłączaniu komórek w pożywkach bez surowicy
• Zmiany kształtu, polaryzacji i morfologii komórek
• Zwiększona proliferacja komórek i zmniejszone różnicowanie
• Mniejsza reaktywność na hormony i czynniki wzrostu

Naukowcy rozpoczęli następnie powlekanie naczyń zarówno materiałami biologicznymi  (powłoka biologiczna), jak i syntetycznymi polimerami  (powłoka chemiczna), które mogą zwiększać przyczepność, wzrost i różnicowanie komórek. Wzrost komórek na powlekanych powierzchniach jest bardziej odpowiednią reprezentacją środowiska naturalnego w przeciwieństwie do wzrostu komórek na płaskich, dwuwymiarowych powierzchniach z tworzywa sztucznego. Technikę tę można zakwalifikować jako fizjologiczne środowisko 2D lub warunki hodowli komórkowej 2,5D.

Rysunek 1. Komórki w obecności białek macierzy zewnątrzkomórkowej zachowują się fizjologicznie lepiej niż komórki w warunkach 2D.

Komórki hodowane w obecności biologicznej (białka macierzy zewnątrzkomórkowej) lub chemicznej (poli-lizyna...) powłoki podlegają bardziej fizjologicznym zachowaniom niż komórki hodowane w klasycznych warunkach hodowli komórkowej 2D.

ECM Proteins

Tkanki to nie tylko ciasno upakowane komórki; większość objętości zawiera przestrzeń pozakomórkową i jest wypełniona złożoną siatką białek zwaną macierzą pozakomórkową (ECM). składniki ECM w większości tkanek są wydzielane przez fibroblasty i są podzielone na proteoglikany i białka włókniste (kolagen, żelatyna, fibronektyna i laminina).⁴ Składniki te zapewniają wsparcie strukturalne i ułatwiają komunikację komórkową. Integryny, białka transmembranowe na powierzchni komórek, które łączą cytoszkielet komórek z ECM, aktywują szlaki sygnałowe, które regulują proliferację komórek, morfologię, adhezję i śmierć komórek.

Laminina

Lamina jest głównym składnikiem blaszki podstawnej. Składa się z trzech długich łańcuchów polipeptydowych (oznaczonych jako α, β i γ) połączonych wiązaniami dwusiarczkowymi i ułożonych w asymetryczny kształt krzyża. Laminina działa jak klej, który utrzymuje komórki i ECM razem. Posiada aktywne domeny do wiązania kolagenu, adhezji komórek, wiązania heparyny i fragmentu wzrostu neurytu. Laminina moduluje wzrost komórek, ruchliwość i szlaki sygnałowe^3,8.

Tabela 1.Próbki dostępnych produktów lamininowych można znaleźć na naszej stronie poświęconej czynnikom wiążącym.

Nazwa	Numer produktu	Format
Format
Laminin from Engelbreth-Holm-Swarm murine sarcoma basement membrane	L2020	Rozwiązanie
Laminina z ludzkich fibroblastów	L4544	. Rozwiązanie

Fibronektyna

Fibronektyna  jest dużą glikoproteiną (220 kDa) składającą się z dwóch łańcuchów polipeptydowych (dimer) połączonych wiązaniami dwusiarczkowymi na jednym końcu. Każdy polipeptyd jest dalej składany w funkcjonalnie i strukturalnie odrębne domeny, które wiążą się z różnymi składnikami ECM (glikozaminoglikanami, proteoglikanami i kolagenem) oraz białkami powierzchniowymi komórek.Fibronektyna jest wydzielana przez szeroką gamę komórek tkanki łącznej, w tym: fibroblasty, chondrocyty, komórki Schwanna, makrofagi, komórki nabłonka jelitowego i hepatocyty⁷.

.

Rysunek 2. Struktura fibronektyny.

Fibronektyna jest wielofunkcyjnym białkiem zaangażowanym w adhezję i rozprzestrzenianie się komórek. Reguluje również morfologię komórkową, migrację komórek, organizację cytoszkieletu, hemostazę i naprawę ran.

Tabela 2.Próbka dostępnych produktów z fibronektyną,odwiedź naszą stronę poświęconą czynnikom wiążącym.

Nazwa	Numer produktu	Format
Fibronektyna osocza bydlęcego	F1141	Roztwór
Fibronektyna z osocza bydlęcego	F4759	Liofilizowany proszek
Fibronektyna ludzkie osocze	F2006	Liofilizowany proszek
Fibronektyna ludzkie osocze	F0895	Rozwiązanie
Human Plasma Fibronectin Purified Protein	FC010	Roztwór

Rysunek 3. Struktura błony podstawnej, w tym białka ECM laminina, kolagen i fibronektyna.

Kolagen

Kolagen jest najobficiej występującym białkiem u ssaków, stanowiącym 25% całkowitej masy białka. Składa się z trzech łańcuchów polipeptydowych (oznaczonych jako łańcuchy alfa) ułożonych w konformacji helikalnej, bogatych w reszty glicyny i proliny.  Istnieje ponad 20 różnych typów kolagenów, z których kolagen I, II, III, V i XI to kolagen fibrylarny powszechnie występujący w tkance łącznej. Kolagen typu IX i XII to kolagen związany z fibrylami, który łączy fibryle ze sobą i ze składnikami macierzy zewnątrzkomórkowej. Natomiast kolagen typu IV i VII to kolagen tworzący sieć, który stanowi główną część blaszki podstawnej.⁵

W tkankach kolagen zapewnia wsparcie strukturalne, wytrzymałość i sprężystość, a w hodowli komórkowej jest wykorzystywany do badania wzrostu, różnicowania i migracji komórek⁶.

Tabela 3.Próbka dostępnych produktów kolagenowych, odwiedź naszą stronę z czynnikami przyłączeniowymi.

Nazwa	Numer produktu	Format	Opis .	Format	Opis
Kolagen z ludzkiego łożyska	C5533	Roztwór	Ludzki kolagen typu IV
Ludzki kolagen typu III	CC054	Roztwór	Człowiek, typ III
Kolagen z ogona szczura	C7661	Liofilizowany proszek	Ogon szczura, typ I
Kolagen z ogona szczura	C3867	Roztwór	Ogon szczura, typ I
Kolagen ze skóry cielęcej	C8919	Roztwór	Skóra cielęca, typ I<
Kolagen z chrząstki mostka kurczaka	C9301	.Liofilizowany proszek	Chrząstka mostka kurczaka, typ II<<
Kolagen z błony podstawnej mięsaka mysiego Engelbreth-Holm-Swarm<	C0543	Liofilizowany proszek<	Mouse, Type IV

Żelatyna

Żelatyna to heterogeniczna mieszanina rozpuszczalnych w wodzie białek o wysokiej średniej masie cząsteczkowej, która jest obecna w kolagenie. Białka są ekstrahowane poprzez gotowanie odpowiedniej skóry, ścięgien, więzadeł i kości w wodzie. Żelatyna typu A pochodzi z tkanki utwardzanej kwasem, podczas gdy typ B pochodzi z tkanki utwardzanej wapnem.

Żelatyna ze świńskiej skóry, określana jako żelatyna typu A, jest wytwarzana z kwaśnego trawienia kolagenu i składa się głównie z glicyny, proliny i hydroksyproliny. Żelatyna ta wykazuje losową strukturę cewki po trawieniu z potrójnego helikalnego kolagenu, różniąc się od żelatyny bydlęcej typu B w sekwencji N-końcowej.

Żelatyna jest powszechnie stosowana w celu poprawy przyczepności komórek i powlekania płytek lub naczyń do hodowli komórkowych stosowanych do hodowli embrionalnych komórek macierzystych, hodowli komórek jąder i rozetek nerwowych.

Tabela 4.Próbka dostępnych produktów żelatynowych, odwiedź naszą stronę czynników przywiązania.

Nazwa	Numer produktu	Format	Opis
Żelatyna ze skóry ryb zimnowodnych	G7041	Liofilizowany proszek	Skóra ryb zimnowodnych<
Roztwór żelatyny	G1393	.Roztwór	Skóra bydlęca, typ B
Żelatyna ze skóry bydlęcej	G9391	Liofilizowany proszek
Żelatyna ze świńskiej skóry	G1890	Liofilizowany proszek<	Porcine skin, Type A

Witronektyna

Witronektyna jest glikoproteiną o 459 aminokwasach, występującą w ECM i krwi. Krąży we krwi w postaci pojedynczego łańcucha o masie 75 kDa lub jako dwa łańcuchy o masie 65 kDa i 10 kDa. Witronektyna oddziałuje z polisacharydami (glikozaminoglikanami) i proteoglikanami, działając jako cząsteczka adhezyjna komórek. Chociaż witronektyna i fibronektyna mają podobne funkcje i mają sekwencję rozpoznawania komórek Arg-Gly-Asp, są one strukturalnie i immunologicznie różne.⁹

Witronektyna działa jako inhibitor cytolitycznego szlaku dopełniacza i odgrywa fizjologiczną rolę w szlaku krzepnięcia. Ponadto promuje migrację komórek, proliferację, różnicowanie i rozprzestrzenianie się komórek śródbłonka i komórek nowotworowych.

Tabela 5.Próbka dostępnych produktów witronektyny, odwiedź naszą stronę poświęconą czynnikom wiążącym.

Nazwa	Numer produktu	Format	Opis
Vitronectin human	SRP3186	.Liofilizowany proszek	Rekombinant ludzki, wyrażony w komórkach HEK 293
Witronektyna, ludzkie oczyszczone białko	CC080	Roztwór	Ludzkie osocze
PluriSTEM-XF® Rekombinowana witronektyna	CC130<	Roztwór	Ludzka rekombinowana, wyrażona w E. coli (bez ksenonów)

Powłoki chemiczne i syntetyczne: Poli-lizyna i poli-ornityna

Powłoki z syntetycznych polimerów (poli-aminokwasów) ułatwiają przyłączanie zarówno komórek, jak i białek. Poli-aminokwasy, takie jak poli-lizyna i poli-ornityna tworzą dodatni ładunek na polistyrenie i zwiększają dodatnio naładowane miejsca dostępne do wiązania komórek.¹¹ Są one również stosowane w połączeniu z czynnikami przyłączeniowymi, które mogą promować elektrostatyczne oddziaływanie między ujemnie naładowanymi jonami na błonie komórkowej i dodatnio naładowanymi jonami czynników przyłączeniowych na powierzchni hodowli.

Tabela 6.Próbki dostępnych produktów poli-lizyny i poli-ornityny, odwiedź naszą stronę poświęconą czynnikom wiążącym.

Nazwa	Numer produktu	Format	Opis
Poly-L-Lysine	P4707	Roztwór	Mol wt 70 - 150 kDa
	P4832	Rozwiązanie	Mol wt 150 - 300 kDa
	P6282	. Liofilizowany proszek	Mol wt 70 - 150 kDa
Poly-D-Lysine	P6407	Liofilizowany proszek	Mol wt 70 - 150 kDa
	P7280	Liofilizowany proszek	Mol wt 30 - 70 kDa
	P7405	Liofilizowany proszek	Mol wt >300 kDa
	A-003-M	Roztwór	Mol wt >300 kDa
Poly-L-Ornithine	P4957	Rozwiązanie	Mol wt 30 - 70 kDa
	A-004-M	Rozwiązanie	Mol wt 78 kDa

Gotowe do użycia, wstępnie zmieszane roztwory czynników adhezyjnych

Nasze gotowe do użycia roztwory mieszanek czynników adhezyjnych są przeznaczone do powlekania kolb i płytek do hodowli komórkowych, promując przyłączanie, różnicowanie i proliferację różnych typów komórek, w których adhezja zależy od powierzchni pokrytej ECM. Konwencjonalne metody hodowli komórkowej obejmują czasochłonne etapy przygotowawcze, w tym powlekanie płytek różnymi czynnikami adhezyjnymi, co może wydłużyć ogólny czas badania. Te rozwiązania w zakresie mieszania czynników adhezyjnych pomagają uprościć przygotowanie hodowli komórkowej, zmniejszyć optymalizację użytkownika końcowego, zminimalizować liczbę kroków i potrzebny czas oraz zmniejszyć ilość odczynników do mycia. Naukowcy mogą również zainicjować swoje testy tego samego dnia, co powlekanie płytek, eliminując potrzebę nocnego oczekiwania przed zastosowaniem drugiego czynnika wiążącego. Stężenie robocze mieszaniny czynników adhezyjnych jest wstępnie zoptymalizowane do stosowania w płytkach 10 x 96-dołkowych, eliminując potrzebę rozcieńczania.

Zastosowania mieszaniny czynników adhezyjnych

Połączenie lamininy z poli-l-lizyną (PLL), poli-l-ornityną (PLO) lub poli-d-lizyną (PDL) jest często stosowane do hodowli i promowania przyłączania i różnicowania komórek nabłonkowych i neuronalnych. Mieszanki te mogą być przechowywane w temperaturze pokojowej i są bardziej stabilne w porównaniu do samej lamininy, która wymaga przechowywania w temperaturze -20˚C i jest podatna na denaturację przy powtarzających się cyklach zamrażania-rozmrażania. Gdy komórki mogą trawić poli-L-lizynę, zaleca się stosowanie mieszanki Lamininy z poli-D-lizyną, aby zapobiec nadmiernemu wychwytowi L-lizyny.

Aby zweryfikować skuteczność gotowych do użycia mieszanek Lamininy, neuronalne komórki macierzyste (NSC) hodowano przy użyciu dwóch metod powlekania w celu porównania. W standardowej metodzie, PLL/PLO/PDL i laminina były inkubowane razem, po czym następowało płukanie i druga całonocna inkubacja. Stosując naszą nową uproszczoną metodę, PLL (LPLL001), lub PLO (LPLO001), lub PDL (LPDL001) inkubowano ze wstępnie wymieszanym roztworem do powlekania lamininą przez 1 godzinę w temperaturze 37°C. Wyniki pokazują przyłączenie i proliferację NSC przy użyciu gotowych do użycia mieszanin roztworów powlekających (rysunki 4-6).

Rysunek 4. Test hodowli neuronalnych komórek macierzystych. A. Powłoka przygotowana przez 1-godzinną inkubację w temperaturze 37°C ze wstępnie zmieszanym roztworem powlekającym lamininy z PDL. B. Powłoka przygotowana przez całonocną inkubację z PDL, a następnie płukanie i drugą całonocną inkubację z Lamininą. C. NSC hodowano przez 48 godzin na płytce TC bez żadnej powłoki.

Rysunek 5. Test hodowli neuronalnych komórek macierzystych. A. Powłoka przygotowana przez 1-godzinną inkubację w temperaturze 37°C ze wstępnie zmieszanym roztworem powlekającym lamininy z PLL. B. Powłoka przygotowana przez całonocną inkubację z PLL, a następnie płukanie i drugą całonocną inkubację z Lamininą. C. NSC hodowano przez 48 godzin na płytce TC bez żadnej powłoki.

Rysunek 6. Test hodowli neuronalnych komórek macierzystych. A. Powłoka przygotowana przez 1-godzinną inkubację w temperaturze 37°C ze wstępnie zmieszanym roztworem powlekającym lamininy z PLO. B. Powłoka przygotowana przez całonocną inkubację z PLO, a następnie płukanie i drugą całonocną inkubację z Lamininą. C. NSC hodowano przez 48 godzin na płytce TC bez żadnej powłoki.

Nasza mieszanka Fibronektyna - Żelatynowy Roztwór Powlekający jest odpowiednia do stosowania w hodowlach bez surowicy lub z obniżoną zawartością surowicy i jest szczególnie przydatna do hodowli linii komórek mięśnia sercowego HL-1 i komórek śródbłonka.

Na rysunku 7 różne linie komórkowe (komórki BHK21, komórki CHO, komórki F9 i linia komórek mięśnia sercowego HL-1) były hodowane na roztworze powlekającym fibronektyna/żelatyna (FG001). Wszystkie linie komórkowe wykazały doskonałe przyleganie i proliferację, potwierdzając skuteczność gotowego do użycia roztworu powlekającego Fibronektyna - Żelatyna.

Rysunek 7. Wzrost linii komórkowych przy użyciu roztworu powlekającego fibronektyna-żelatyna. A. Komórki BHK21 (fibroblasty z nerki chomika); B. Komórki CHO (jajnik chomika chińskiego); C. Komórki F9 (mysi rak zarodkowy jądra); D. Linia komórek mięśnia sercowego HL-1 (SCC065).

Nasze gotowe do użycia, wstępnie zmieszane roztwory czynników adhezyjnych oferują oszczędność czasu i wydajną alternatywę dla testów hodowli komórkowych, umożliwiając badaczom rozpoczęcie eksperymentów tego samego dnia, co powlekanie płytek. Dostarczone wyniki eksperymentalne wykazują przydatność tych mieszanin dla różnych typów komórek, co czyni je cennymi narzędziami do usprawnienia i udanych eksperymentów hodowli komórkowej.

Powlekane paski i płytki do adhezji komórek

Paski do adhezji komórek Millicoat^®

Paski do adhezji komórek Millicoat^® to 12 wymiennych 8-dołkowych pasków, które mieszczą się w ramce płytki, zapewniając wygodę i elastyczność podczas projektowania testów komórkowych. Studzienki w rzędach A-G są wstępnie pokryte białkiem ECM, takim jak fibronektyna lub witronektyna, a rząd H jest pokryty BSA, aby służyć jako kontrola negatywna. Komórki można następnie wysiać na pokrytą powierzchnię, a przylegające komórki można utrwalić i wybarwić.

Tabela 7.Produkty do adhezji komórek Millicoat^®.

Numer produktu	Format	. Opis
ECM101	Paski powlekaneECM (96-dołkowe)	Millicoat® Human Fibronectin Coated Strips (96-Wells)
ECM102		Millicoat®. Human Vitronectin Coated Strips (96-Wells)
ECM103		Millicoat® Human Laminin Coated Strips (96-Wells)
ECM104		Millicoat® Human Collagen Type I Coated Strips (96-Wells)
ECM105		Millicoat® Human Collagen Type IV Coated Strips (96-Wells)
ECM205		Millicoat® ECM Screening Kit, 1 ea. ECM101-ECM105

Płytki CytoSoft

Sztywność podłoża, na którym rosną komórki, wpływa na ich funkcje komórkowe. Płytki CytoSoft^® pokryte są cienką warstwą biokompatybilnego silikonu, o różnych sztywnościach obejmujących szeroki zakres fizjologiczny. Powierzchnia żeli tworzy stabilne wiązania kowalencyjne z białkami, ułatwiając powlekanie żelu czynnikami adhezyjnymi (składnikami ECM) i umieszczanie komórek. Płytki CytoSoft^® posiadają następujące cechy:

• Optycznie przejrzyste i mają niską autofluorescencję
• Żele silikonowe nie są podatne na hydrolizę
• Żele silikonowe są stabilne, nie wysychają ani nie pęcznieją
• Odporne na rozrywanie lub pękanie
• Sztywność prawie niezmieniona podczas wydłużonych okresów przechowywania<
• Trypsyna i kolagenaza może być używana do pobierania komórek
• Odporny na rozkład biochemiczny po obróbce enzymatycznej

Tabela 8. Płytki do adhezji komórek CytoSoft^®.

Numer produktu	Format	. Opis
5140-5EA	Płytki pokryte silikonem (6-dołkowe)	Moduł sprężystości 0.5 kPa
5141-5EA		Moduł sprężystości 2 kPa
5142-5EA		.Moduł sprężystości 8 kPa
5143-5EA		Moduł sprężystości 16 kPa
5144-5EA		.Moduł sprężystości 32 kPa
5145-5EA		.Moduł sprężystości 64 kPa
5165-5EA		Moduły sprężystości 0.2 kPa
5190-7EA		Discovery Kit, Multiple Elastic Moduli, (0.2, 0.5, 2, 8, 16, 32, 64 kPa)

Inne białka ECM w hodowli komórkowej

Pokrycie powierzchni hodowli białkami ECM i syntetycznymi polimerami znacząco wpływa na zachowanie komórek. Obserwowana odpowiedź zależy zarówno od typu komórek, jak i powłoki użytej jako podłoże. Komórki w kontakcie z czynnikami wiążącymi przeżywają dłużej i mogą być również hodowane przy braku czynników surowicy.³ Czynniki wiążące mogą sekwestrować i przechowywać czynniki wzrostu, kontrolując przestrzenno-czasową regulację czynników i ułatwiając krzyżową wymianę między receptorami czynników wzrostu a receptorami ECM. Określają również właściwości mechaniczne i instruują komórki do różnicowania się w sprzyjających warunkach. Białka ECM indukują sygnalizację wewnątrzkomórkową poprzez receptor na powierzchni komórki w synergii z sygnalizacją czynnika wzrostu.¹² Ponieważ hodowla komórkowa ewoluuje, potrzeba więcej składników i kombinacji, aby lepiej naśladować warunki tkanek i rozszyfrować język macierzy zewnątrzkomórkowej między komórkami.

Tabela 9.Różne białka adhezyjne do zastosowań w hodowli komórkowej; więcej informacji można znaleźć na naszej stronie czynniki adhezyjne.

Numer produktu	Format	. Opis
H4777	Rozwiązanie	Mysi proteoglikan siarczanu heparanu
CC065	Rozwiązanie	Human Tenascin-C Purified Protein
ECM002	Liofilizowany proszek	Human Thrombospondin-1 recombinant, expressed in HEK 293 cells
CC117	Rozwiązanie	Chicken Extracellular Chondroitin Sulfate Proteoglycans
A1960	Liofilizowany proszek	Aggrecan z bydlęcej chrząstki stawowej
D8428	Liofilizowany proszek	Dekoryna z bydlęcej chrząstki stawowej

Materiały

Przepraszamy, wystąpił nieoczekiwany błąd

Network error: Failed to fetch

Referencje

1. Curtis AS, Forrester JV, McInnes C, Lawrie F. 1983. Adhesion of cells to polystyrene surfaces.. 97(5):1500-1506. https://doi.org/10.1083/jcb.97.5.1500

2. Amstein CF, Hartman PA. 1975. Adaptation of plastic surfaces for tissue culture by glow discharge. J. Clin. Microbiol.. 2(1):46-54.

3. Kleinman H, Luckenbill-Edds L, Cannon F, Sephel G. 1987. Use of extracellular matrix components for cell culture. Analytical Biochemistry. 166(1):1-13. https://doi.org/10.1016/0003-2697(87)90538-0

4. Lodish H, Berk A, Lawrence Zipursky S, Matsudaira P, Baltimore D, Darnell J. 2000. Molecular Cell Biology. 4. New York: W.H. Freeman.

5. Alberts B, Johnson A, Lewis J, Raff M, Roberts K, Walter P. 2002. Molecular Bioloy of the Cell. 4. New York: Garland Science.

6. Kleinman HK, Klebe RJ, Martin GR. 1981. Role of collagenous matrices in the adhesion and growth of cells.. 88(3):473-485. https://doi.org/10.1083/jcb.88.3.473

7. Mather J. 1984. Mammalian Cell Culture The Use of Serum-free Hormone-supplemented Media. New York: Plenum Press.

8. Gamm DM, Melvan JN, Shearer RL, Pinilla I, Sabat G, Svendsen CN, Wright LS. 2008. A Novel Serum-Free Method for Culturing Human Prenatal Retinal Pigment Epithelial Cells. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci.. 49(2):788. https://doi.org/10.1167/iovs.07-0777

9. Preissner KT. 1991. Structure and Biological Role of Vitronectin. Annu. Rev. Cell. Biol.. 7(1):275-310. https://doi.org/10.1146/annurev.cb.07.110191.001423

10. Reyes CD, Petrie TA, García AJ. 2008. Mixed extracellular matrix ligands synergistically modulate integrin adhesion and signaling. J. Cell. Physiol.. 217(2):450-458. https://doi.org/10.1002/jcp.21512

11. Mazia D, Schatten G, Sale W. 1975. Adhesion of cells to surfaces coated with polylysine. Applications to electron microscopy.. 66(1):198-200. https://doi.org/10.1083/jcb.66.1.198

12. Rozario T, DeSimone DW. 2010. The extracellular matrix in development and morphogenesis: A dynamic view. Developmental Biology. 341(1):126-140. https://doi.org/10.1016/j.ydbio.2009.10.026