P5568

プロテイナーゼ K from Tritirachium album

≥500 units/mL, buffered aqueous glycerol solution

• 別名: エンドペプチダーゼK
• CAS番号: 39450-01-6
• Enzyme Commission number: 3.4.21.64 (BRENDA, IUBMB)
• MDL番号: MFCD00132129
• UNSPSCコード: 12352204
• eCl@ss: 32160410
• NACRES: NA.54

特性

• 由来生物: microbial (T.album; T. ALBUM)
• 品質水準: 200
• フォーム: buffered aqueous glycerol solution
• 分子量: 28.93 kDa
• 濃度: ≥10 mg/mL; ≥500 units/mL
• テクニック: DNA extraction: suitable
• 保管温度: 2-8°C

詳細

詳細

細胞外エンドペプチダーゼであるプロテイナーゼKは、カビのTritirachium album Limberにより合成されます。プロテイナーゼKは、サブチリシンの新しいサブファミリーに属しています。これは277個のアミノ酸から成るタンパク質であり、非加水分解性タンパク質鎖と自己溶解性ポリペプチド鎖を特徴としています。[1]

アプリケーション

Tritirachium albumから得られたプロテイナーゼKは、以下の用途に使用されています。

• 病理組織検査時に心筋を破壊するために[2]
• HEK-293細胞の消化時に[3]

DNAおよびRNAの分離中にヌクレアーゼのタンパク質分解性不活性化を行うために有用です。

DNAおよびRNA分離中にヌクレアーゼのタンパク質分解性不活性化を行うために有用です。
リゾチーム、リボヌクレアーゼAなどの陽イオン性タンパク質に結合するエンドトキシンを除去します。
肝臓、酵母、リョクトウのミトコンドリアを分離するために有用であることが報告されています
膜上の酵素局在化を評価します
抗体標識のためパラフィン包埋組織切片処理に使用され、抗原結合部位を露出させます。
伝達性海綿状脳症（TSE）研究において、プリオンを調べるために、脳組織サンプルのタンパク質を分解する目的で使用されます。

Tritirachium albumから得られたプロテイナーゼKは、DNA断片化のin situ検出や、[4]インターロイキン1ra（IL-1ra）の構造的柔軟性を測定するためのタンパク質分解実験に使用されています。[5]

シグマの酵素は、密封されたサイトゾル側の小胞体の消化に使用されています。[3]in situハイブリダイゼーションの前に、ミツバチの解剖された脳および／または全体を除タンパクするために使用されています。これは、ミツバチのニューロペプチドY様シグナル伝達、栄養介在性の遺伝子発現および行動の研究中に行われました。[6]

生物化学的／生理学的作用

プロテイナーゼKは、幅広い特異性を持ち、天然状態でも多くのタンパク質を分解します。脂肪族および芳香族アミノ酸のカルボキシル基に隣接するペプチド結合を、α-アミノ基がブロックされた状態で主に切断します。[7][8][9]最適なpHは7.5～9.0[7][8]で、等電点は8.9です。[7]活性化にはCa²⁺（1～5 mM）が必要です。プロテイナーゼKはDIFPまたはPMSFによって阻害されます。[8]

プロテイナーゼＫは安定した反応性の高いセリンプロテアーゼです。結晶構造および分子構造の研究で得られたエビデンスは、この酵素がスブチリシンファミリーに属し、活性部位が触媒三残基造（Asp³⁹-His⁶⁹-Ser²²⁴）を持つことを示しています。プロテイナーゼＫは広範囲の環境（pH、バッファー塩、界面活性剤［SDS］、温度）で安定です。 0.1～0.5%のSDSの存在下でプロテイナーゼKは活性を保ち、DNA調製において分離されたDNAの完全性を損なうことなくさまざまなタンパク質およびヌクレアーゼを分解します。

単位の定義

1ユニットは、pH 7.5、37°Cで1分間に尿素変性ヘモグロビンを加水分解し1.0 μmolチロシン相当の発色を生ずる酵素量です(Folin-Ciocalteu試薬で発色)。

物理的形状

10 mM Tris-HCl(pH 7.5), 1 mM酢酸カルシウムを含有する40%グリセロ-ルに溶解された溶液

調製ノート

溶液中のプロテイナーゼKは、4.0～12.5のpH範囲（最適なpH 8.0）で安定であり、使用中の25～65°Cの温度範囲でも安定です。pH 8.0では、溶液は4°Cで少なくとも12か月間安定です。[8]pH 4～11.5では、Ca²⁺（1～6 mM）を含む溶液は数週間安定であると予想されます。4°Cで保存された80%硫酸アンモニウム懸濁液は、少なくとも12か月間安定です。[7]

安全性情報

• ピクトグラム: GHS08
• シグナルワード: Danger
• 危険有害性情報: H334
• 注意書き: P261 - P284 - P501
• 危険有害性の分類: Resp. Sens. 1
• 保管分類コード: 10 - Combustible liquids
• WGK: WGK 1
• 引火点(°F): Not applicable
• 引火点(℃): Not applicable
• 個人用保護具 (PPE): Eyeshields, Faceshields, Gloves, type ABEK (EN14387) respirator filter