P8375

Perossidasi

Type VI, essentially salt-free, lyophilized powder, ≥250 units/mg solid (using pyrogallol)

• Sinonimo/i: Enzima di rilevamento, HRP, Perossidasi, Donatore: idrogeno-perossido ossidoreduttasi, Perossidasi di rafano
• Numero CAS: 9003-99-0
• Classificazione EC (Enzyme Commission): 1.11.1.7 (BRENDA, IUBMB)
• Numero CE: 232-668-6
• Numero MDL: MFCD00071339
• Codice UNSPSC: 12352204
• eCl@ss: 32160410
• NACRES: NA.54

Proprietà

• Tipo: Type VI
• Forma fisica: essentially salt-free, lyophilized powder
• Attività specifica: ≥250 units/mg solid (using pyrogallol)
• PM: ~44 kDa
• Solubilità: 0.1 M phosphate buffer: soluble 10 mg/mL, clear, orange to red (pH 6.0)
• Rapporto di assorbanza: RZ 2.5-4.0
• applicazioni: diagnostic assay manufacturing
• Temperatura di conservazione: 2-8°C
• InChI: 1S/H2O3/c1-3-2/h1-2H; JSPLKZUTYZBBKA-UHFFFAOYSA-N

Descrizione

Descrizione generale

La perossidasi di rafano si isola dalle radici del rafano (Amoracia rusticana) e appartiene al gruppo delle perossidasi con ferroprotoporfirina. L′HRP è un polipeptide a singola catena che contiene quattro ponti disolfuro. È una glicoproteina che contiene il 18% di carboidrati. La composizione dei carboidrati include galattosio, arabinosio, xilosio, fucosio, mannosio, mannosamina e galattosamina, a seconda del singolo isozima. Il peso molecolare (circa 44 kDa) include la catena polipeptidica (33.890 Dalton), la emina con Ca²⁺ (circa 700 Dalton) e il carboidrato (circa 9.400 Dalton). Esistono almeno sette isoenzimi di HRP. Il punto isoelettrico degli isoenzimi della perossidasi di rafano è compreso fra 3,0 e 9,0.

Applicazioni

La perossidasi da rafano (HRP) è isolata da radici di rafano (Amoracia rusticana) e fa parte del gruppo delle perossidasi da ferroprotoporfirine. È usato in applicazioni biochimiche come Western blot, ELISA e immunoistochimica. La perossidasi del rafano è usata per amplificare un segnale debole e aumentare la rivelabilità di una molecola bersaglio come una proteina. Il prodotto P8375 tipo VI è una polvere liofilizzata essenzialmente priva di sali. È comunemente usato per determinare i livelli di glucosio e perossidi in soluzione. È stato impiegato per studiare l′ingresso sensoriale dei neuroni del midollo spinale.

L′enzima è stato usato per sviluppare un biosensore termostabile con la soia basato sulla perossidasi facendo una reazione incrociata e ′collegando′ elettricamente l′enzima attraverso un idrogel conduttivo a un elettrodo al carbonio vetroso. È stato anche usato per determinare l′ossidazione di lipoproteine a bassa densità.

Azioni biochim/fisiol

HRP si combina bene con l′acqua ossigenata (H₂O₂) e il complesso risultante [HRP-H₂O₂] è in grado di ossidare una grande varietà di donatori di idrogeno. Il pH ottimale è fra 6,0 e 6,5 e l′enzima ha la massima stabilità nell′intervallo di pH 5,0-9,0. HRP si può coniugare ad anticorpi con diversi metodi inclusi la glutaraldeide, ossidazione con periodato, attraverso legami disolfuro e anche via cross linker a base di ammine e tioli. È più piccolo e più stabile degli enzimi marcatori galattosidasi-β e fosfatasi alcalina e per questo è la marcatura preferita. Per di più la sua glicolizzazione porta a minori legami non specifici.

Incubata con un substrato la perossidasi del rafano produce un derivato colorato fluorimetrico o luminescente della molecola marcata consentendone la quantifica. È stato dimostrato che la perossidasi del rafano riduce leggermente il livello di inibizione in un mutante cydAB. Gli inibitori conosciuti sono azoturo di sodio, cianuro, L-cistina, dicromato, etilentiourea, idrossilammina, solfuro, vanadato, acido p-amminobenzoio e ioni Cd²⁺, Co²⁺, Cu²⁺, Fe³⁺, Mn²⁺, Ni²⁺e Pb²⁺ .

Definizione di unità

Una unità di pirogallolo forma 1,0 mg di purpurogallina da pirogallolo in 20 secondi a pH 6,0 e 20 °C.

Risultati analitici

Il RZ (Reinheitszahl) è il rapporto di assorbanza A₄₀₃/A₂₇₅ determinato a 0,5-1,0 mg/mL in acqua deionizzata. Misura il contenuto di emina, non l′attività enzimatica. Anche preparazioni con un RZ elevato possono avere una bassa attività enzimatica.

Altre note

Per maggiori informazioni sulla perossidasi visitare la pagina www.sigma-aldrich.com/enzymeexplorer.

Informazioni sulla sicurezza

• Pittogrammi: GHS08
• Avvertenze: Danger
• Indicazioni di pericolo: H334
• Consigli di prudenza: P261 - P284 - P501
• Classi di pericolo: Resp. Sens. 1
• Codice della classe di stoccaggio: 11 - Combustible Solids
• Classe di pericolosità dell'acqua (WGK): WGK 1
• Dispositivi di protezione individuale: Eyeshields, Gloves, type N95 (US)