G2133

Glucosio ossidasi

Type VII, lyophilized powder, ≥100,000 units/g solid (without added oxygen)

• Sinonimo/i: β-D-glucosio: ossigeno 1-ossidoreduttasi, G.Od., GOx
• Numero CAS: 9001-37-0
• NACRES: NA.54
• UNSPSC Code: 12352204
• EC Number: 232-601-0
• MDL number: MFCD00063989
• Numero CE: 1.1.3.4 (BRENDA, IUBMB)
• Specific activity: ≥100,000 units/g solid (without added oxygen)

Proprietà

• type: Type VII
• Quality Segment: 200
• form: lyophilized powder
• specific activity: ≥100,000 units/g solid (without added oxygen)
• mol wt: 160 kDa
• does not contain: extender
• composition: Protein, ≥60%
• application(s): diagnostic assay manufacturing
• foreign activity: Catalase ≤10 Sigma units/mg protein
• shipped in: wet ice
• storage temp.: −20°C
• SMILES string: O1[C@H]([C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H]1CO)O)O)O)O
• InChI: 1S/C6H12O6/c7-1-2-3(8)4(9)5(10)6(11)12-2/h2-11H,1H2/t2-,3-,4+,5-,6-/m1/s1
• InChI key: WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N

Descrizione

General description

Peso molecolare: 160 kDa (filtrazione su gel)
pI: 4,2
Coefficiente di estinzione: E^1% = 16,7 (280 nm)

La glucosio ossidasi da Aspergillus niger è un dimero composto da due subunità uguali con massa molecolare di 80 kDa ciascuna. Ogni subunità contiene una frazione di flavina adenina dinucleotide e un ferro. L′enzima è una glicoproteina contenente il ~16% di zucchero neutro e il 2% di zuccheri amminici. L′enzima contiene inoltre 3 residui di cisteina e 8 potenziali siti di glicosilazione N-legata.

La glucosio ossidasi è in grado di ossidare i D-aldoesosi, i monodeossi-D-glucosi e i metil-D-glucosi a velocità variabili.

Il pH ottimale per la glucosio ossidasi è 5,5, ma la sua attività si svolge entro un ampio range compreso tra 4 e 7. La glucosio ossidasi è specifica per il β-D-glucosio con un K_M di 33-110 mM.

La glucosio ossidasi non richiede alcun attivatore, ma è inibita da Ag⁺, Hg²⁺, Cu²⁺, acetato fenilmercurico e p-cloromercuribenzoato. Non è inibita dai reagenti SH non metallici: N-etilmaleimide, iodoacetato e iodoacetammide.

La glucosio ossidasi può essere utilizzata nella determinazione enzimatica del D-glucosio in soluzione. Poiché la glucosio ossidasi ossida il β-D-glucosio in D-gluconolattato e perossido di idrogeno, come enzima di accoppiamento per la determinazione del glucosio si utilizza spesso la perossidasi di rafano. Sebbene la glucosio ossidasi sia specifica per il β-D-glucosio, è possibile quantificare le soluzioni di D-glucosio dal momento che il α-D-glucosio effettua la mutarotazione a β-D-glucosio mentre il β-D-glucosio viene consumato dalla reazione enzimatica.

Application

Diverse pubblicazioni citano l′uso della glucosio ossidasi G2133 nei propri protocolli e in varie applicazioni, tra cui le seguenti:
a) Sviluppo di biosensori:

• Diazoresin nanofilm coatings on alginate microspheres: Srivastava, R. et al., Biotechnol. Bioeng., 91(1), 124-131 (2005).
• Biosensori di glucosio basati su carta: Lankelma, J. et al., Anal. Chem., 84(9), 417-4152 (2012)
• Dispositivo microfluidico con glucosio ossidasi immobilizzata su idrogel per l′analisi della glicemia: He, R.-Y. et al., RSC Adv., 9, 32367-32374 (2019).

b) Studio con FRET a singola molecola sulla formazione del filamento RAD51 umano: Subramanyam, S. et al., Methods Enzymol., 600, 201-232 (2018).
c) Pile a combustibile enzimatiche con membrane a base di chitosano: Bahar, T., and Yazici, M.S., Electroanalysis, 32(6), 1304-1314 (2020).

La glucosio ossidasi è ampiamente utilizzata nell′industria alimentare e farmaceutica ed è un importante componente dei biosensori di glucosio.

Biochem/physiol Actions

La glucosio ossidasi catalizza l′ossidazione del β-d-glucosio in d-glucono-β-lattone e perossido di idrogeno, con l′ossigeno molecolare come accettore di elettroni.

Physical form

Polvere liofilizzata contenente sali di tampone fosfato e cloruro di sodio

Analysis Note

Proteina determinata da biureto.

Può contenere tracce di amilasi, maltasi, glicogenasi, invertasi e galattosio ossidasi.

Other Notes

Un′unità ossida 1,0 μmole di β-D-glucosio in D-gluconolattone e H₂O₂ in un minuto con pH 5,1 e 35 °C, equivalenti a un assorbimento di O₂ di 22,4 μl in un minuto. Se la miscela di reazione è satura di ossigeno, l′attività può aumentare anche del 100%.

Informazioni sulla sicurezza

• pictograms: GHS08
• signalword: Danger
• hcodes: H334
• pcodes: P261 - P284 - P304 + P340 + P312 - P501
• Hazard Classifications: Resp. Sens. 1
• Classe di stoccaggio: 11 - Combustible Solids
• wgk: WGK 1
• ppe: dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves