C9407
Collagenasi
powder, Suitable for the digestion and isolation of physiologically active pancreatic islet cells, suitable for cell culture
Sinonimo/i:
Clostridiopeptidasi A
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About This Item
Prodotti consigliati
Origine biologica
Clostridium histolyticum
Livello qualitativo
Stato
powder
Attività specifica
≥800 units/mg solid
PM
68-130 kDa
Confezionamento
pkg of 1 μmol
tecniche
cell culture | mammalian: suitable
pH
7.4
Temperatura di conservazione
−20°C
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Descrizione generale
L′enzima collagenasi derivato da Clostridium histolyticum possiede un dominio di legame del collagene e domini simili alla malattia policistica del rene (PDK-like). Possiede anche un sito di legame Ca2+ per legare il calcio, essenziale per la sua funzionalità. L′uso della collagenasi è rivolto al trattamento della contrattura di Dupuytren, un disturbo del tessuto connettivo.′
Applicazioni
La collagenasi da Clostridium histolyticum è stata usata per la digestione di:
- campioni di pancreas per l′isolamento delle isole
- campioni di arterie polmonari per l′isolamento di cellule muscolari lisce vascolari del polmone (PVSMC)
- campioni di cartilagine per l′isolamento di condrociti
Questo prodotto è adatto per la disgregazione di tessuti tumorali umani, renali murini, cerebrali adulti e fetali, polmonari e di molti tipi di tessuti epiteliali. Si è dimostrato efficace anche in studi di perfusione epatica e renale, nella digestione del pancreas, nell′isolamento di cellule epatiche non parenchimali di ratto e nella preparazione di epatociti. La collagenasi è stata usata anche nella preparazione di tessuto arterioso per lo studio dei prodotti finali della glicolisazione avanzata. L′enzima è stato testato per l′isolamento di epatociti a una concentrazione di circa 1 mg/mL. Per la digestione si usano tipicamente concentrazioni comprese fra 0,1 e 5 mg/mL.
Azioni biochim/fisiol
Il prodotto a base di collagenasi è una miscela di enzimi secreti da C. histolyticum e i diversi prodotti si differenziano in base ai rispettivi rapporti tra i 10-18 componenti presenti negli enzimi secreti. I componenti principali sono due collagenasi, la clostripaina e una proteasi neutra. L′azione sinergica di questi enzimi degrada il collagene e altro materiale intracellulare. Per un′efficace liberazione delle cellule dal tessuto è necessaria l′azione di entrambe le collagenasi e della proteasi neutra. Diversi tipi di collagene costituiscono i substrati naturali della collagenasi.
La collagenasi è attivata da quattro grammi atomo di calcio per mole di enzima. È inibita da etilen-glicol-bis(beta-amminoetil etere) - acido N, N, N′,N′-tetraacetico, beta-mercaptoetanolo, glutatione, acido tioglicolico e 8-idrossichinolina.
Avvertenza
Questo prodotto come fornito è stabile per un anno a -20 °C. Non c′è perdita in FALGPA o nell′attività della proteasi in 30 giorni a 37 °C, 50 °C e -20 °C. Soluzioni di collagenasi grezza sono stabili se congelate rapidamente in aliquote (a 10 mg/mL) e mantenute congelate a -20 °C. Ulteriori cicli di congelamento-scongelamento danneggerebbero la soluzione. Il prodotto tenuto in ghiaccio conserva il 100% di attività per 7 ore.
Definizione di unità
Una unità di digestione del collagene (CDU) libera peptidi da collagene proveniente da tendine d′Achille bovino equivalente in colore ninidrina a 1,0 μmole di leucina in 5 ore a pH 7,4 a 37 °C in presenza di ioni calcio. Una unità di idrolisi FALGPA idrolizza 1,0 μmole di furilacriloil-Leu-Gly-Pro-Ala per minuto a 25 °C. Una unità di proteasi neutra idrolizza caseina e produce colore equivalente a 1,0 μmole di tirosina per 5 ore a pH 7,5 a 37 °C. Una unità di clostripaina idrolizza 1,0 μmole of BAEE per minuto a pH 7,6 a 25 °C in presenza di DTT.
Nota sulla preparazione
Questo prodotto viene preparato a partire dalla collagenasi di tipo XI (C7657) da Clostridium histolyticum. Contiene anche clostripaina, una proteasi neutra non specifica e attività triptiche. Solitamente le soluzioni si preparano a concentrazioni di 1-2 mg/mL in tampone TESCA, con 50 mM TES, 0,36 mM calcio cloruro, pH 7,4 a 37 °C.
Substrato
N° Catalogo
Descrizione
Determinazione del prezzo
Avvertenze
Danger
Indicazioni di pericolo
Consigli di prudenza
Classi di pericolo
Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
Organi bersaglio
Respiratory system
Codice della classe di stoccaggio
11 - Combustible Solids
Classe di pericolosità dell'acqua (WGK)
WGK 1
Punto d’infiammabilità (°F)
Not applicable
Punto d’infiammabilità (°C)
Not applicable
Dispositivi di protezione individuale
dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves
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Protocolli
To measure collagenase activity, N-(3-[2-Furyl]acryloyl)-Leu-Gly-Pro-Ala is used in a continuous spectrophotometric rate determination at 345 nm. Collagenase hydrolyzes collagen peptide bonds.
Il team dei nostri ricercatori vanta grande esperienza in tutte le aree della ricerca quali Life Science, scienza dei materiali, sintesi chimica, cromatografia, discipline analitiche, ecc..
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