C5138

Collagenasi

suitable for release of physiologically active rat hepatocytes, Type IV, 0.5-5.0 FALGPA units/mg solid, ≥125 CDU/mg solid

• Sinonimo/i: Clostridiopeptidasi A
• Numero CAS: 9001-12-1
• Classificazione EC (Enzyme Commission): 3.4.24.3 (BRENDA, IUBMB)
• Numero CE: 232-582-9
• Numero MDL: MFCD00130830
• Codice UNSPSC: 12352204
• NACRES: NA.54

Proprietà

• Origine biologica: Clostridium histolyticum
• Livello qualitativo: 200
• Forma fisica: powder
• Attività specifica: ≥125 CDU/mg solid; 0.5-5.0 FALGPA units/mg solid
• PM: 68-130 kDa
• tecniche: cell culture | mammalian: suitable; single cell analysis: suitable
• Solubilità: TESCA buffer (50 mM TES, 0.36 mM Calcium chloride, pH 7.4): soluble 0.05-0.1 mg/mL at 37 °C
• Compatibilità: suitable for release of physiologically active rat hepatocytes
• applicazioni: diagnostic assay manufacturing
• Condizioni di spedizione: wet ice
• Temperatura di conservazione: −20°C

Descrizione

Applicazioni

La collagenasi da Clostridium histolyticum è stata impiegata:

• nella preparazione di soluzioni di collagenasi per la digestione di tessuti tumorali
• come supplemento in un tampone fosfato per la digestione di tessuto grasso mesenterico estirpato
• come supplemento nel terreno di coltura Roswell Park Memorial Institute-1640 (RPMI-1640) per la digestione di segmenti di colon
• per la digestione di tessuti dell′endometrio
• nella preparazione degli enzimi A e B per la digestione di testicoli decapsulati

La collagenasi è stata usata nella preparazione di tessuto arterioso per lo studio dei prodotti finali della glicosilazione avanzata (AGE). L′enzima è anche stato impiegato insieme ad altre proteasi per la disgregazione di tessuti tumorali umani, reni di topo, cervelli umani, epitelio polmonare e molti altri. È anche efficace negli studi di perfusione di fegato e reni, digestione pancreatica e isolamento di epatociti non parenchimali. Questo enzima è stato sottoposto a test di idoneità per il rilascio di epatociti a una concentrazione di circa 1 mg/mL in un volume totale di 100 mL per ciascun fegato di ratto.

Idoneo per l′impiego nella preparazione di sospensioni di cellule singole per successivo sequenziamento.

Azioni biochim/fisiol

Il Clostridium histolyticum produce due classi di collagenasi. Le collagenasi da Clostridium sono più efficienti di quelle mammifere e hanno più siti di taglio all′interno della tripla elica del collagene. La collagenasi da Clostridium è implicata nell′invasione batterica tipica della cancrena gassosa.

Il rilascio effettivo delle cellule dal tessuto richiede l′azione degli enzimi collagenasi e la proteasi neutra. La collagenasi è attivata da quattro grammi-atomo di calcio (Ca²⁺) per mole di enzima. Il filtrato della coltura si ritiene contenga almeno 7 diverse proteasi con pesi molecolari compresi fra 68 e 130 kDa. Il pH ottimale è fra 6,3 e 8,8. L′enzima è usato tipicamente per digerire i componenti del connettivo nei campioni di tessuto per liberare cellule singole. Il trattamento con collagenasi può indurre la morte di qualche cellula. Per la digestione si usano tipicamente concentrazioni comprese fra 0,1 e 5 mg/mL. La durata della reazione varia da 15 minuti a parecchie ore e apporta una soddisfacente dissociazione delle cellule senza causare un′alta moria cellulare. Viene preferito il tampone Krebs Ringer con calcio e BSA e lo Zn²⁺ è necessario per l′attivazione.

La collagenasi è attivata da quattro grammi atomo di calcio per mole di enzima. È inibita da etilen-glicol-bis(beta-amminoetil etere) - acido N, N, N′,N′-tetraacetico, beta-mercaptoetanolo, glutatione, acido tioglicolico e 8-idrossichinolina.

Avvertenza

Questo prodotto come fornito è stabile per un anno a -20°C. In 30 giorni a 37 °C, 50 °C e -20°C non si osserva perdita di attività FALGPA o proteasica. Soluzioni di collagenasi grezza sono stabili se congelate rapidamente in aliquote (a 10 mg/mL) e conservate a -20°C. Ulteriori cicli di congelamento-scongelamento finiscono per danneggiare la soluzione. Il prodotto tenuto in ghiaccio conserva il 100% di attività per 7 ore.

Definizione di unità

Una unità di digestione del collagene (CDU) libera peptidi da collagene proveniente da tendine d′Achille bovino equivalente in colore ninidrina a 1,0 μmole di leucina in 5 ore a pH 7,4 a 37 °C in presenza di ioni calcio. Una unità di idrolisi FALGPA idrolizza 1,0 μmole di furilacriloil-Leu-Gly-Pro-Ala per minuto a 25 °C. Una unità di proteasi neutra idrolizza caseina e produce colore equivalente a 1,0 μmole di tirosina per 5 ore a pH 7,5 a 37 °C. Una unità di clostripaina idrolizza 1,0 μmole of BAEE per minuto a pH 7,6 a 25 °C in presenza di DTT.

Nota sulla preparazione

Le soluzioni tipicamente sono preparate a 1-2 mg/mL in tamponi TESCA (contenenti 50 mM TES, 0,36 mM di calcio cloruro, pH 7,4 a 37 °C).
Questo prodotto contiene anche clostripaina, proteasi neutre e attività triptiche.

Informazioni sulla sicurezza

• Pittogrammi: GHS08,GHS07
• Avvertenze: Danger
• Indicazioni di pericolo: H315,H319,H334,H335
• Consigli di prudenza: P261 - P264 - P271 - P280 - P302 + P352 - P305 + P351 + P338
• Classi di pericolo: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
• Organi bersaglio: Respiratory system
• Codice della classe di stoccaggio: 11 - Combustible Solids
• Classe di pericolosità dell'acqua (WGK): WGK 1
• Punto d’infiammabilità (°F): Not applicable
• Punto d’infiammabilità (°C): Not applicable
• Dispositivi di protezione individuale: dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves