R6513

Ribonuclease A

for molecular biology, ≥70 Kunitz units/mg protein, lyophilized

• Sinônimo(s): RNase A, Ribonuclease pancreática, Ribonucleato de 3′-pirimidinooligonucleotidohidrolase
• Número CAS: 9001-99-4
• Número da licença da enzima: 3.1.27.5 (BRENDA, IUBMB)
• Número CE: 232-646-6
• Número MDL: MFCD00132181
• Código UNSPSC: 12352204
• NACRES: NA.53

Propriedades

• grau: for molecular biology
• Nível de qualidade: 300
• forma: lyophilized
• atividade específica: ≥70 Kunitz units/mg protein
• peso molecular: 13.7 kDa; ~13,700
• atividade externa: Exonuclease and endonuclease, none detected; NICKase and DNase, none detected
• temperatura de armazenamento: −20°C
• InChI: 1S/C9H14N4O3/c10-2-1-8(14)13-7(9(15)16)3-6-4-11-5-12-6/h4-5,7H,1-3,10H2,(H,11,12)(H,13,14)(H,15,16)
• chave InChI: CQOVPNPJLQNMDC-UHFFFAOYSA-N

Descrição

Descrição geral

A RNAse A, Ribonuclease A, é uma endorribonuclease que cliva as ligações fosfodiéster do RNA de fita simples após nucleotídeos pirimidina. Ela ataca na extremidade fosfato 3′ (por exemplo, pG-pG-pC-pA-pG será clivado para produzir pG-pG-pCp e A-pG). A maior atividade é exibida com um RNA de fita simples. A RNase A é um polipeptídeo de cadeia simples com 4 pontes bissulfeto. Ao contrário da RNase B, ela não é uma glicoproteína. As ribonucleases não hidrolisam DNA porque o DNA não tem os grupos 2′-OH, que são essenciais para a formação de intermediários cíclicos. A RNase A também pode hidrolisar RNA de amostras de proteína. A RNase A pode ser inibida por alquilação de His12 e His119 e ativada por sais de potássio e sódio. A RNase é inibida na presença de íons de metais pesados. A RNase também é inibida competitivamente por DNA.

A RNase A é um polipeptídeo de cadeia simples, com 124 aminoácidos ligados por pontes bissulfeto. Ao contrário da RNase B, a RNase A não é uma glicoproteína. A RNase A pode ser inibida por alquilação de His¹² ou His¹¹⁹, que estão presentes no sítio ativo da enzima. Os ativadores de RNase A incluem sais potássicos e sódicos.

A RNase A é uma endorribonuclease que ataca no ponto 3′OH fosfato de um nucleotídeo pirimidina. A sequência pG-pG-pC-pA-pG será clivada para gerar pG-pG-pCp e A-pG. A maior atividade é exibida com um RNA de fita simples.

Aplicação

• A RNase A é usada para remover RNA de preparados de plasmídeo de DNA e DNA genômico e amostras de proteína.
• A RNase A também é usada para análise de sequência de RNA e ensaios de proteção.
• A RNase A foi usada como ferramenta para desenvolvimento de fármacos auxiliado por computador.
• A RNase A dá suporte à análise de sequências de RNA.
• A RNase A hidrolisa o RNA contido em amostras de proteínas.
• A purificação do DNA é apoiada pela RNase A.

A ribonuclease A de pâncreas bovino foi usada:

• para purificação de DNA plasmidial;
• para digerir e impedir a coloração de RNA dupla-fita durante a coloração de núcleos;
• em detecção por imunoperoxidase e imunofluorescência;
• para tratar células antes de citometria de fluxo;
• como um componente de tampão de pós-hibridização para lavagem dos cortes de tecido FFPE (fixados em formalina e embebidos em parafina) pós-hibridização in situ;
• pra tratar células durante o preparo de extratos de proteínas da membrana externa (OMP).
• ensaios de proteção contra RNases;
• remoção de RNA ligado de forma inespecífica;
• análise de sequências de RNA;
• hidrólise de RNA contido em amostras de proteína.

Características e benefícios

Nossa ribonuclease A altamente estável, a RNase A, é adequada para remoção de RNA, sequenciamento de RNA e purificação de DNA.

Nota de análise

Proteína determinada por E.

Outras notas

Os ativadores de RNase A incluem sais potássicos e sódicos. A RNase A pode ser inibida por alquilação da sua His12 ou His119.

Uma importante aplicação da RNase A é a remoção de RNA de preparados de DNA plasmidial. Para essa aplicação, é usada RNase A isenta de DNase em uma concentração final de 10 μg/ml.

Não é necessário ferver soluções-estoque desse produto de RNase A para inativar DNase residual e fazê-lo pode levar à precipitação da RNase e possível perda de atividade enzimática. Se uma solução de RNase A for aquecida em pH neutro, haverá precipitação. Quando aquecida em um pH mais baixo, pode haver alguma precipitação devido à presença de impurezas proteicas.

Informações de segurança

• Pictogramas: GHS08
• Palavra indicadora: Danger
• Frases de perigo: H334
• Declarações de precaução: P261 - P284 - P501
• Classificações de perigo: Resp. Sens. 1
• Código de classe de armazenamento: 11 - Combustible Solids
• Classe de risco de água (WGK): WGK 3
• Ponto de fulgor (°F): Not applicable
• Ponto de fulgor (°C): Not applicable
• Equipamento de proteção individual: Eyeshields, Gloves, type N95 (US)