LLDH-RO

L-Lactatdehydrogenase (L-LDH)

• EC-Nummer: 1.1.1.27 (BRENDA, IUBMB)
• UNSPSC-Code: 12352204

Eigenschaften

• Biologische Quelle: rabbit muscle
• Qualitätsniveau: 100
• Form: suspension
• Spezifische Aktivität: ~550 units/mg protein (at 25 °C (1,100 U/mg at 37 °C) with pyruvate as the substrate.)
• Mol-Gew.: 140,000 Da
• Verpackung: pkg of 10 mL (10127884001 [100 mg]); pkg of 2 mL (10127230001 [10 mg]); pkg of 5 mL (10127876001 [25 mg])
• Hersteller/Markenname: Roche
• Methode(n): activity assay: suitable
• Farbe: white
• pH-Wert: 6.0-7.0
• Löslichkeit: water: miscible
• NCBI-Hinterlegungsnummer: XM_008252245.3
• UniProt-Hinterlegungsnummer: P13491
• Anwendung(en): life science and biopharma
• Fremdaktivität: Aldolase <0.001%; GOT <0.01%; GPT <0.01%; MDH <0.01%; PK <0.001%; myokinase <0.01%
• Versandbedingung: wet ice
• Lagertemp.: 2-8°C
• Angaben zum Gen: rabbit ... LOC100355262(100355262)

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

L-Lactat: NAD⁺-Oxidoreduktase.
L-Lactatdehydrogenase katalysiert die reversible Reduktion von Pyruvat zu L-Lactat.

Spezifität

L(+)-Lactatdehydrogenase (LDH) ist spezifisch für L(+)-Lactat (relative Geschwindigkeit = 100). Sie reagiert nicht mit D(-)-Lactat. LDH oxidiert Glyoxylat (Oxoacetat), Glycerat und 3-Halogen-Derivate von L-Lactat langsam (Geschwindigkeit bei jedem ≤ 1); 3-Phosphoglycerat reagiert nicht. LDH reduziert Pyruvat (2-Oxopropanat; relative Geschwindigkeit = 100) und andere 2-Oxosäuren (z. B. 2-Oxobutyrat) mit Geschwindigkeiten, die mit steigender Kettenlänge der Säure schnell abnehmen. Herz-LDH reagiert mit 2-Oxobutyrat mit höherer Geschwindigkeit als mit Skelettmuskel-LDH. LDH oxidiert auch 2,4-Diketosäuren (relative Geschwindigkeit = 10). Das Enzym ist relativ spezifisch für NAD(H) (relative Geschwindigkeit = 100); NADP(H) wird deutlich weniger effizient genutzt (relative Geschwindigkeit < 1). Repräsentative K_m für (Schweine-)Skelettmuskel-LDH (pH-Wert 7,5) sind Lactat, 8,3 mM; Pyruvat, 0,12 mM; NAD, 0,10 mM; NADH, 0,012 mM. Repräsentative K_m für (Schweine-)Herz-LDH (pH-Wert 7,5) sind Lactat, 3,3 mM; Pyruvat, 0,15 mM; NAD, 0,07 mM; NADH, 0,011 mM. Allgemein ist die erforderliche Konzentration von Pyruvat (Reduktionsreaktion) oder L-Lactat (Oxidationsreaktion) zum Erreichen einer Maximalgeschwindigkeit mit LDH für Präparate aus Herzgewebe geringer als für Präparate aus Skelettmuskeln.

Anwendung

Reduktion von α-Ketosäuren zu α-Hydroxycarbonsäuren oder Rückreaktion.

Sequenz

LDH ist ein Tetramer (Molekülmasse = etwa 140.000 D, Kaninchenmuskel- oder Schweineherz-LDH). Bei Säugetieren gibt es zwei LDH-Untereinheiten, M und H, mit ähnlicher Molekülmasse (Molekülmasse der Untereinheit ≈ 36.500 D), aber unterschiedlicher Aminosäurenzusammensetzung.
Daher gibt es bei Säugetieren 5 elektrophoretisch unterscheidbare LDH-Isoenzyme, LDH-1 bis LDH-5, mit unterschiedlicher Untereinheitenzusammensetzung.
Die Molekülmasse von allen LDH-Isoenzymen ist etwa dieselbe.
- LDH-1 (H₄), LDH-2 (H₃M): überwiegende Komponente von Herz-LDH
- LDH-3 (H₂M₂): Hauptkomponente von LDH aus lymphatischem Gewebe
- LDH-4 (HM₃), LDH-5 (M_{4): überwiegendes LDH in Skelettmuskeln oder Leber}

Hinweis: Die M-Untereinheit von LDH wurde früher als A-Untereinheit bezeichnet; die H-Untereinheit wurde als B-Untereinheit bezeichnet. Nach der alten Bezeichnung war das LDH-1-Isoenzym LDH-B4.

Einheitendefinition

Eine Einheit (U) Lactatdehydrogenase reduziert bei +25 °C und pH-Wert 7,0 in 1 Minute 1 µMol Pyruvat zu L-Lactat.







Hinweis: Für Zubereitungen H und I wird die Aktivität bei +30 °C und pH-Wert 7,8 bestimmt. Der vorstehende Assay verbraucht je Mol reduziertes Pyruvat 1 Mol NADH. Für die Reduktionsreaktion, Pyruvat als Substrat





1 U (+25 °C) 1,5 U (+37 °C) [Schweinemuskel-LDH in Glycerin].





1 U (+25 °C) 1,8 U (+37 °C) [Schweinemuskel-LDH in Ammoniumsulfat].





1 U (+25 °C) 1,1 U (+30 °C) 2,0 U (+37 °C) [Kaninchenmuskel-LDH].





1 U (+25 °C) 1,4 U (+30 °C) 2,5 U (+37 °C) [Schweineherz-LDH].





1 U (+25 °C) 2,5 U (+37 °C) [Rinderherz-LDH].

Physikalische Form

Suspension in 3,2 M Ammoniumsulfatlösung, pH-Wert etwa 7

Angaben zur Herstellung

Aktivator: 2-Amino-2-methyl-1-propanol, Diethanolamin, Fluorid und Heparin (Oxidationsreaktion). Natriumsulfit (Na₂SO₃) schützt das Enzym vor den Auswirkungen von Thiol angreifenden Reagenzien. Mercaptane können die hemmende Wirkung von Thiol angreifenden Reagenzien umkehren.

Hinweis zur Analyse

Absorption:Das aufgereinigte Enzym aus Rinderherz weist eine Absorption von 14,9 (10 mg/ml, 280 nm) auf.

Sonstige Hinweise

Nur für die Life-Science-Forschung. Nicht zur Verwendung in diagnostischen Verfahren vorgesehen.

Sicherheitshinweise

• Lagerklassenschlüssel: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: WGK 1
• Flammpunkt (°F): does not flash
• Flammpunkt (°C): does not flash