蛋白質純化

蛋白質純化的關鍵因素

選擇蛋白質純化策略時，蛋白質結構和功能通常是需要考慮的關鍵因素。重組蛋白質的生化或生物活性部分取決於蛋白質中的離散結構域，而其中的離散結構域通常取決於蛋白質折疊成二級、三級和四級結構。

蛋白質折疊被統稱為高階結構 (HOS)，對於蛋白質的正確三維形狀和功能來說是不可或缺的。重組蛋白通常包含 N 端和 C 端標籤，這些小序列用於免疫組織化學檢測和純化，或蛋白質親和層析，這取決於特定的 N 端和 C 端標籤以及預期的下游應用。

蛋白質純化方法與應用

無論研究人員是以研究蛋白質功能為目的，或是希望利用下游、工業規模的生物製劑和製藥生產策略來擴大蛋白質純化的規模，都有許多蛋白質純化方法、試劑和工具可供使用。所選的蛋白質純化方法將部分決定樣品製備的工作流程。親和層析是一種合適的初始純化步驟，可純化含有相關標記的溶解重組蛋白；然而，不需要的蛋白也可能會與親和樹脂柱結合，並在最後的洗滌過程中與所需的相關蛋白一起洗出。如果需要額外的純化，可使用尺寸排阻層析法或離子交換層析法等輔助純化策略。重要的是，許多親和標籤可以移除，因為研究人員可能希望從最終純化的蛋白質中移除任何非原生序列。