Procedura Maxiprep plazmidu GenElute™ HP

Wideo: Procedura amplifikacji plazmidu

Zestaw GenElute™ HP Plasmid Maxiprep oferuje prostą, szybką i opłacalną metodę izolacji plazmidowego DNA z rekombinowanych hodowli E. coli . Odzyskane plazmidowe DNA jest gotowe do natychmiastowego użycia w dalszych zastosowaniach, takich jak trawienie restrykcyjne, ligacja, sekwencjonowanie, PCR, transformacja i transfekcja.

• Objętość hodowli - 150 ml hodowli bakteryjnej
• Wydajność - do 1.2 mg wysokokopijnego plazmidowego DNA
• Szybkość - Od zebranej kultury bakteryjnej do czystego plazmidowego DNA w 30 minut lub mniej
• Elastyczność - Oferuje elastyczność formatu próżniowego lub wirowego, nie opiera się na przepływie grawitacyjnym lub ultrawirowaniu<
• Ekonomiczny - Niższy koszt przygotowania plus wyższa wydajność przygotowania to podwójna oszczędność

Kroki Maxiprep DNA plazmidowego

1. Wiruj 150 ml hodowli przez noc.

2. Dodaj 12 mL roztworu do zawieszania.

3. Pipetuj w górę i w dół lub worteksuj, aby całkowicie zawiesić osad bakteryjny.

4. Dodaj 12 ml buforu do lizy.

5. Pozostaw mieszaninę na 5 minut.

6. Delikatnie odwróć 6-8 razy. Nie worteksować.

7. Przygotować strzykawkę filtrującą.

8. Dodać 12 ml roztworu neutralizującego do mieszaniny.

9. Delikatnie odwrócić 4-6 razy.

10. Dodać 9 ml roztworu wiążącego do mieszaniny.

11. Odwrócić 1-2 razy.

12. Wlać mieszaninę do cylindra strzykawki filtrującej.

13. Pozostawić lizat na 5 minut.

14. Dodaj 12 ml roztworu przygotowującego kolumnę do kolumny wiążącej, umożliwiając jej przejście.
    

15. Po 5-minutowej inkubacji usuń klarowny lizat do świeżej probówki zbiorczej. Nie jest konieczne wtłaczanie pozostałości lizatu przez strzykawkę filtrującą.

16. Wlej lizat do kolumny wiążącej i pozwól mu przejść.

17. Dodaj 12 ml roztworu płuczącego 1 do kolumny wiążącej i pozwól mu przejść.

18. Dodaj 12 ml roztworu płuczącego 2 do kolumny wiążącej i pozwól mu przejść.

19. Pozostaw próżnię włączoną na 10 minut, aby wysuszyć kolumnę. W przypadku więcej niż 6 kolumn maxiprep, suszyć przez co najmniej 20 minut.

20. Przenieść kolumnę wiążącą do czystej probówki zbiorczej.

21. Dodaj 3 ml roztworu elucyjnego do kolumny i wiruj przez 5 minut.

22. Plazmidowe DNA jest teraz obecne w eluacie.

.