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使用法
sufficient for ≤20 tests
メーカー／製品名
Roche
保管温度
20-25°C
詳細
本キットは、DNAラダー解析のためのアポトーシス性DNAの分離方法を提供します。使用する精製法は、他のDNA精製法（例、フェノール/クロロホルム抽出、DNA沈殿）よりも非常に高速です。精製されたDNAは、ゲルローディングバッファーと直接混合でき、アガロースゲル上で分析できます。
細胞死の研究には、アポトーシスであるか、またはネクローシスであるかといった死の解析が含まれます。アポトーシスは以下によって特徴付けられます：
同様に、ネクローシス（または生理学的細胞死）は以下によって特徴付けられます
これらの違いが示すように、細胞死の分類は、細胞の形態観察を通じて、あるいは、より客観的には、ゲノムDNAの解析によって可能です。ゲル上でのDNAの分離は、アポトーシスとネクローシスを区別するための、迅速でドキュメンタブルな形のデータを提供します。
細胞死の研究には、アポトーシスであるか、またはネクローシスであるかといった死の解析が含まれます。アポトーシスは以下によって特徴付けられます：
- 溶解前の、DNAの非ランダムフラグメンテーション（アガロースゲル電気泳動後の「ラダー」パターン）1
- 膜結合小胞（または「アポトーシス小体」）の形成
- 細胞質の濃度による細胞の収縮
同様に、ネクローシス（または生理学的細胞死）は以下によって特徴付けられます
- DNAのランダム消化（アガロースゲル電気泳動後のDNAスメア）
- 膜のインテグリティの喪失と細胞の溶解による、オルガネラおよび細胞の膨張
- 溶解後のDNAフラグメンテーション
これらの違いが示すように、細胞死の分類は、細胞の形態観察を通じて、あるいは、より客観的には、ゲノムDNAの解析によって可能です。ゲル上でのDNAの分離は、アポトーシスとネクローシスを区別するための、迅速でドキュメンタブルな形のデータを提供します。
特異性
キットに概説した条件下では、核酸のみがガラスファイバーフィルターに結合します。塩類、タンパク質、および他の細胞成分は結合しません。
アプリケーション
包装
1つのキットには6のコンポーネントが含まれています。
原理
血液または細胞の溶解は、特別な結合/溶解バッファーでサンプルをインキュベートすることで可能です。サンプルは、ガラスファイバーフリースを含むカラムを通して遠心分離されます。結合/溶解バッファーでは、核酸は迅速かつ選択的にガラスファイバーの表面に結合します。洗浄バッファーは塩類、タンパク質、およびその他の細胞の残骸などを洗浄除去します。DNAはその後、溶出バッファーと共に、遠心分離ステップを介して回収されます。
調製ノート
使用液：注記： 精製反応を始める前に、溶出バッファーを70°Cに温めてください。他のすべての試薬は15～25°Cで使用してください。
使用液の調製
EDTA溶液（0.5 M）
18.6 gのEDTAを80 mLの再蒸留水に溶解し、撹拌します。1 M NaOHを使用してpHを8.0 ± 0.1に調整します。EDTAはアルカリ性のpHのみで溶解してください。溶解後、再蒸留水で100 mLにします。
TBE-バッファー
5.4 gのTris、2.8 gのホウ酸を、800 mLの再蒸留水に溶解し、2 mL
の0.5 M EDTA溶液を加えます。溶けるまで撹拌し、最終的なpHを8.0 ± 0.1とします。再蒸留水で全量を1Lにします。
エチジウムブロマイドのストック溶液
50 mgのエチジウムブロマイドを5 mLの再蒸留水に溶解します（エチジウムブロマイドには変異原性および癌原性があります。グローブを着用し、エチジウムブロマイド溶液を扱うときは注意してください）。
別の方法として、SYBR Green I Nucleic Acid Gel Stain がエチジウムブロマイドの代わりに使用できます。
ローディングバッファー（10倍）
0.1 gのドデシル硫酸ナトリウム、25 mgのブロモフェノールブルーを、7 mLの再蒸留水に溶解し、3 mLのグリセロールを加えます
保管条件（使用液）：分離したコントロールDNAを-15～-25°Cで保存した場合、ポジティブコントロールは調製後14日間使用できます。
使用液の調製
- 80 mLのエタノール（分析グレード）を洗浄バッファーに加えます。
- ポジティブコントロール（紫色のキャップ）を400 μLの結合/溶解バッファーに溶解し、すぐに混合します。
- 15～25°Cで10分間インキュベートします。
EDTA溶液（0.5 M）
18.6 gのEDTAを80 mLの再蒸留水に溶解し、撹拌します。1 M NaOHを使用してpHを8.0 ± 0.1に調整します。EDTAはアルカリ性のpHのみで溶解してください。溶解後、再蒸留水で100 mLにします。
TBE-バッファー
5.4 gのTris、2.8 gのホウ酸を、800 mLの再蒸留水に溶解し、2 mL
の0.5 M EDTA溶液を加えます。溶けるまで撹拌し、最終的なpHを8.0 ± 0.1とします。再蒸留水で全量を1Lにします。
エチジウムブロマイドのストック溶液
50 mgのエチジウムブロマイドを5 mLの再蒸留水に溶解します（エチジウムブロマイドには変異原性および癌原性があります。グローブを着用し、エチジウムブロマイド溶液を扱うときは注意してください）。
別の方法として、SYBR Green I Nucleic Acid Gel Stain がエチジウムブロマイドの代わりに使用できます。
ローディングバッファー（10倍）
0.1 gのドデシル硫酸ナトリウム、25 mgのブロモフェノールブルーを、7 mLの再蒸留水に溶解し、3 mLのグリセロールを加えます
保管条件（使用液）：分離したコントロールDNAを-15～-25°Cで保存した場合、ポジティブコントロールは調製後14日間使用できます。
その他情報
ライフサイエンス研究のみに使用できます。診断用には使用できません。
法的情報
購入者への注意事項：本製品は、Qiagenの保有する特許のライセンスを受けています。
キットの構成要素のみ
製品番号
詳細
- Binding/Lysis Buffer
- Washing Buffer
- Elution Buffer
- Polypropylene Tubes, contain two layers of glass fiber fleece and can hold up to 700 μl sample volume
- Polypropylene Collection Tubes
- Control Apoptotic U937 Cells, lyophilized
シグナルワード
Danger
危険有害性情報
危険有害性の分類
Acute Tox. 4 Oral - Aquatic Chronic 3 - Eye Dam. 1 - Skin Irrit. 2
保管分類コード
12 - Non Combustible Liquids
WGK
WGK 2
引火点(°F)
does not flash
引火点(℃)
does not flash
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資料
Cellular apoptosis assays to detect programmed cell death using Annexin V, Caspase and TUNEL DNA fragmentation assays.
ライフサイエンス、有機合成、材料科学、クロマトグラフィー、分析など、あらゆる分野の研究に経験のあるメンバーがおります。.
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