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DIG RNAラベリングキット（SP6/T7）

sufficient for 2 x 10 labeling reactions, kit of 1 (12 components), suitable for hybridization, suitable for Southern blotting

• 別名: DIGシステム, rna標識
• UNSPSCコード: 41105500

特性

• 使用法: sufficient for 2 x 10 labeling reactions
• 品質水準: 100
• 包装: kit of 1 (12 components)
• メーカー／製品名: Roche
• 環境により配慮した代替製品の特徴: Designing Safer Chemicals; Learn more about the Principles of Green Chemistry.
• sustainability: Greener Alternative Product
• テクニック: Northern blotting: suitable; Southern blotting: suitable; hybridization: suitable
• 環境により配慮した代替製品カテゴリ: , Aligned
• 保管温度: −20°C

詳細

詳細

アッセイ時間：145分
サンプル材料

• 直線化プラスミドDNA
• PCR生成物

原理
DIG RNAラベリングキットは、DIG-標識された、既知の長さの一重鎖RNAプローブを生成します。SP6またはT7 RNAポリメラーゼのどちらも、テンプレートDNAからin vitroでこれらのプローブを転写します（ジゴキシゲニン-UTP存在下）。
in vitro転写によるRNAラベリング
転写されるDNAテンプレートは、SP6およびT7 RNAポリメラーゼのためのプロモーターを含む適切な転写ベクター（例、pSPT 18または19）のポリリンカーサイトに複製されます。隣接したテンプレートDNAが適切な場所で直線化され、RNAポリメラーゼが「ランオフ」転写物を生成します。DIG-UTPは転写物に取り込まれます。新たに合成されたRNAのすべての20～25番目のヌクレオチドが、DIG-UTPです。標準的な転写反応では、ヌクレオチド濃度は限界に達しないため、本反応は大量の標識化RNAを生成できます。

SP6およびT7 RNAポリメラーゼでのin vitro転写による、RNAのジゴキシゲニン-UTPラベリングのためのキット。この方法により、既知の長さの一重鎖RNAプローブが生成され、幅広いハイブリダイゼーションテクニックで使用できます。

メルクは、グリーン・ケミストリーの12原則の1つ以上に則った、より環境に配慮した製品（グリーン代替品）をお客様にお届けできるよう最善の努力をします。この製品はさらに安全な化学品として設計されます。  DIGシステムは、放射活性を用いて核酸の標識付けと検出を行う方法に対する、感度が高くコスト効率に優れた代替方法として確立されました。DIGシステムの多用途性を証明する多くの刊行物が入手できるため、放射標識を使用することは、ハイブリッド形成法用にDNAを標識する唯一のオプションではなくなりました。

特異性

感度および特異性
DIG標識化RNAプローブは、以下のアッセイ条件下で、わずか1 μgの哺乳類DNA中のシングルコピー遺伝子を検出できます。ハイブリダイゼーションミックスは、1 mLあたり20～100 ngの標識化プローブを含み、結合したプローブは、抗-DIG-APで検出され、化学発光基質のCDP-Starで可視化されます。
熱失活：2 μLの 0.2 M EDTA（pH 8.0）を添加して反応を停止します。

アプリケーション

SP6およびT7 RNAポリメラーゼでのin vitro転写による、RNAのDIG-11-UTPラベリング。DIG標識され「ランオフ」された転写物が高い効率で合成され、以下のような幅広いハイブリダイゼーションテクニックで使用できます：

• ノーザンブロット[1]
• サザンブロット
• In situハイブリダイゼーション[2][3][4]
• プラークまたはコロニーリフト
• RNアーゼプロテクション実験

特異性と感度の高いシステムにより、DIG標識化プローブは、1 μgの全ヒトDNAにおけるシングルコピー遺伝子の検出に使用できます。
注意：DIGとUTPの結合はアルカリに耐性があるため、DIG標識化RNAはアルカリ処理による断片化に使用できます。DIG標識化RNAプローブのサイズをわずかに小さくしたものは、in situハイブリダイゼーションにおける特定のアプリケーションにより適しています。

包装

1つのキットには12のコンポーネントが含まれています。

品質

原理：転写されるDNAテンプレートが、SP6および/またはT7 RNAポリメラーゼのためのプロモーターを含む適切な転写ベクターのポリリンカーサイトに複製されます。適切な部位における直線化の後、DIG-UTPの存在下でRNAが転写されます。標準的な条件下では、約10 μgのDIG標識化完全長RNAが、1 μgのテンプレートから転写されます。

その他情報

ライフサイエンス研究のみに使用できます。診断には使用できません。

キットの構成要素のみ

• pSPT18 DNA 0.25 mg/ml
• pSPT19 DNA 0.25 mg/ml
• Control DNA 1, pSPT18-Neo, cleaved with Pvu II 0.25 mg/ml
• Control DNA 2, pSPT19-Neo, cleaved with Pvu II 0.25 mg/ml
• DIG-labeled Control RNA, DIG-labeled "antisense" neo RNA 100 ng/µl
• Unlabeled Control RNA, neo poly (A) "sense" RNA 200 µg/ml
• NTP Labeling Mixture 10x concentrated
Transcription Buffer 10x concentrated
DNase I, RNase-free 10 U/µl
Protector RNase Inhibitor 20 U/µl
SP6 RNA Polymerase 20 U/µl
T7 RNA Polymerase 20 U/µl

すべて表示 (12)

安全性情報

• ピクトグラム: GHS07
• シグナルワード: Warning
• 危険有害性情報: H302,H317,H319
• 注意書き: P261 - P264 - P280 - P333 + P313 - P337 + P313 - P362 + P364
• 危険有害性の分類: Acute Tox. 4 Oral - Eye Irrit. 2 - Skin Sens. 1
• 保管分類コード: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: WGK 2
• 引火点(°F): does not flash
• 引火点(℃): does not flash