Gelová barviva pro elektroforézu proteinů
Po separaci elektroforézou se proteinové pásy běžně vizualizují pomocí barvení gelu. Proteinová barviva na gely využívají buď chemickou reakci s vazbou barviva, nebo chemickou reakci vytvářející barvu a selektivně reagují s proteiny, čímž vzniká obarvený gel. Proteinová gelová barviva se obvykle vybírají na základě počáteční velikosti vzorku, požadované metody detekce a požadavků na kompatibilitu pro následnou analýzu.
Přečtěte si více informací
Produkty
Související zdroje produktů
- Protein Staining Reagents Selection Guide
Sigma offers EZBlue™ and ProteoSilver™ reagents for protein visualization, suitable for proteomics and traditional PAGE formats.
- Handbook: Protein Blotting Tips and Tricks
This handbook represents the collective experience of our application scientists, who are actively engaged in advancing the science of protein blotting and detection. It also includes many of the most common recommendations provided by our technical service specialists who are contacted by scientists worldwide for assistance.
- Brochure: Rethink Western Blotting
Explore our products designed to improve each step of the Western blotting workflow.
Fixační roztoky
Po elektroforéze v gelu se proteiny obvykle "fixují" v gelu, aby se zabránilo jejich rozptýlení před barvením. Některá barviva na gely obsahují chemické látky, které odstraňují nutnost fixovat gely před barvením.
Kolorimetrická barviva na gelové proteiny
- Koomassieho brilantní modř se používá k barvení proteinů na polyakrylamidových gelech prostřednictvím elektrostatických interakcí s amino a karboxylovými skupinami proteinů.
- ReadyBlue™ Protein Gel Stain je rychlé a citlivé koloidní Coomassieho barvivo pro polyakrylamidové gely dodávané jako roztok připravený k použití, což umožňuje rychlejší a zjednodušený protokol. ReadyBlue™ lze zobrazit kolorimetrickou nebo infračervenou fluorescenční metodou. Tento bezpečný přípravek neobsahuje organická rozpouštědla ani kyselinu fosforečnou a lze jej použít až třikrát. S ReadyBlue™ byla prokázána citlivost až 2 ng na pás.
- Reagencie pro barvení geluEZBlue™ je pohodlné, citlivé a bezpečné koloidní barvivo Coomassie Brilliant Blue G-250, které zlepšuje výsledky proteinové elektroforézy a zároveň výrazně zkracuje dobu barvení. Jako koloidní barvivo reaguje pouze s proteiny, nikoliv se samotným gelem. Obarvení pozadí je sníženo, takže proteinové pásy lze na polyakrylamidových gelech a PVDF membránách vizualizovat téměř okamžitě. Není nutný žádný krok k odstranění barvení, ačkoli promývání vodou může zintenzivnit pásy a vyjasnit pozadí. Činidlo EZBlue™ je mimořádně citlivé, detekuje pouhých 5 ng proteinu.
- Sada pro reverzibilní detekci proteinů je jedinečný detekční systém určený k barvení proteinů na nylonových, nitrocelulózových a PVDF membránách nebo PAGE gelech s detekční citlivostí podobnou citlivosti Coomassieho barviv. Většina ostatních barviv vytváří na nylonových membránách vysoké pozadí v důsledku silných nábojových interakcí s membránou. Barvení je snadno reverzibilní pomocí roztoku EDTA, takže blot lze znovu použít pro Western blotting nebo pro analýzu sekvencí aminokyselin.
- Barvivo modrá čerň z Naftolu lze použít k barvení proteinů na polyakrylamidových gelech, agarosových gelech a nitrocelulosových membránách. Po elektroforéze se doporučuje fixovat proteiny v gelu. Poté se gel obarví 0,1% naftolovou modří v 7% (v/v) kyselině octové po dobu nejméně 2 hodin a odbarví se 7% (v/v) roztokem kyseliny octové. Citlivost detekce je přibližně 20 % citlivosti Coomassie Blue
- Sada ProteoSilver™ Silver Stain Kit, která poskytuje nejvyšší citlivost, má citlivost ≥ 0,1 ng proteinu na pás při inkubační době 3-12 minut. Toto barvení se doporučuje pro proteiny s velmi nízkou abundancí a je kompatibilní s aplikacemi MALDI-TOF.
Fluorescenční barviva na gelové proteiny
- EZFluor™ 1-step Fluorescent Protein Gel Stain je fluorescenční barvení proteinového gelu připravené k použití, které vyžaduje pouze jediný 5-30minutový krok barvení bez fixace a může detekovat již přibližně 1-10 ng proteinu na pás. Barvení je plně kompatibilní s hmotnostní spektrometrií a sekvenováním založeným na Edmanově metodě.
- EZFluor™ UV 1-step Fluorescent Protein Gel Stain je barvení proteinového gelu připravené k použití a určené k zobrazování pomocí UV transiluminátoru a ethidium bromidového filtru kompatibilního s hmotnostní spektrometrií.
- SYPRO® Barvení proteinového gelu Ruby je ultracitlivé fluorescenční barvivo připravené k použití pro detekci proteinů separovaných polyakrylamidovou gelovou elektroforézou (PAGE). Toto barvivo, navržené speciálně pro použití v 2-D PAGE, se ukázalo být vynikající volbou i pro 1-D PAGE a gely s izoelektrickou fokusací (IEF). Barvení proteinových gelů SYPRO® Ruby dosahuje citlivosti srovnatelné s mnoha technikami barvení stříbrem.
- Barvení SYPRO® Orange je podobné barvení SYPRO® Red, i když je o něco jasnější a poskytuje o něco vyšší fluorescenci pozadí. Barvivo je účinně excitováno UV nebo širokopásmovým osvětlením. Není vhodné pro barvení proteinů na blotech nebo v IEF gelech a vykazuje sníženou citlivost při barvení proteinů na 2-D gelech.
De-staining Reagents
- CoZap se používá k rychlému odstranění barviva Coomasie blue. Unikátní polštářek CoZap se vkládá přímo do odbarvovací misky a absorbuje veškeré volné barvivo v roztoku, čímž odpadá nutnost výměny odbarvovacího roztoku.
Abyste mohli pokračovat ve čtení, přihlaste se nebo vytvořte účet.
Nemáte účet?Toto je strojově přeložená stránka.