Duolink Fluorophores vary in intensity. Violet is the strongest with low background. Far red is equally strong but may have higher diffuse background in certain cell types. Refer to attached pictures for visual comparison. When doing multicolor flow cytometry, choose fluorophores with minimal spectral overlap. Reserve brightest fluorophore for lowest expressing signal.
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DUO92014
Duolink® In-situ-Detektionsreagenzien Grün
Synonym(e):
in situ Proximity Ligation Assay reagent, Protein Protein Interaction Assay reagent
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About This Item
UNSPSC-Code:
12352200
NACRES:
NA.32
Empfohlene Produkte
Produktlinie
Duolink®
Qualitätsniveau
Methode(n)
proximity ligation assay: suitable
Fluoreszenz
λex 495 nm; λem 527 nm (green) (FITC (Cyanine 2), Zeiss Filter set 38)
Eignung
suitable for fluorescence
Versandbedingung
dry ice
Lagertemp.
−20°C
Allgemeine Beschreibung
Die Duolink® In-situ-Detektionsreagenzien Grün enthalten alle notwendigen Duolink In-situ-Reagenzien zur Amplifikation und Detektion gebundener PLA® Sonden. Die Detektionssonden enthalten ein Fluorophor (lex = 495 nm und lem = 527 nm), das mit dem gleichen Filter wie Cy®2 oder FITC visualisiert werden kann. Experimente mit den Duolink In-situ-Reagenzien ermöglichen Nachweis und Visualisierung von Protein-Interaktionen, Proteinexpressionswerten und posttranslationalen Modifikationen auf Einzelmolekülebene in fixierten Zellen und Gewebeproben.
Spezifität
Grüne Fluoreszenz-Nachweisreagenzien werden oftmals mit FITC-Filter verwendet.
Anwendung
Der Duolink®Proximity Ligation Assay (PLA®) ermöglicht die endogene Detektion von Protein-Interaktionen, posttranslationalen Modifikationen und Proteinexpressionswerten auf Einzelmolekülebene in fixierten Zellen und Gewebeproben.[1][2][3][4]
Leistungsmerkmale und Vorteile
- Keine Überexpression oder genetische Manipulation erforderlich
- Hohe Spezifität (weniger falsch-positive Ergebnisse)
- Einzelmolekül-Sensitivität durch RCA (Rolling Circle Amplifikation)
- Relative Quantifizierung möglich
- Keine Spezialgeräte erforderlich
- Schneller und einfacher als FRET
- Höhere Präzision als co-IP
- Publikationsreife Ergebnisse
Komponenten
- 5x Ligation - Enthält Oligonukleotide, die an die PLA-Sonden und alle für die Ligation benötigten Komponenten außer der Ligase hybridisieren
- 1x Ligase (1 Einheit/μL)
- 1x Polymerase (10 Einheiten/μL)
- 5x Amplification Grün - Enthält alle Komponenten, die für die Rolling Circle Amplification (RCA) erforderlich sind, außer der Polymerase. Es enthält außerdem Oligonukleotid-Sonden, die mit einem Fluorophor markiert sind, das an das RCA-Produkt hybridisiert.
Nicht im Detektionskit enthalten:
Primärantikörper, PLA-Sonden, Waschpuffer, Eindeckmittel
Angaben zur Herstellung
Zur Durchführung eines kompletten Duolink® PLA In-situ-Versuchs benötigen Sie zwei Primärantikörper (PLA-, IHC-, ICC- oder IF-validiert), die zwei Zielepitope erkennen. Andere benötigte Reagenzien sind ein Paar PLA-Sonden von verschiedenen Spezies (eine PLUS und eine MINUS), Nachweisreagenzien, Waschpuffer und Eindeckmittel. Beachten Sie bitte, dass die Primärantikörper von den gleichen Spezies stammen müssen wie die Duolink® PLA-Sonden. Die Analyse wird mit Standardgeräten für Immunfluoreszenz-Assays durchgeführt.
Lagerung und Haltbarkeit
Komponenten bei -20 °C aufbewahren. Die Enzyme müssen kontinuierlich eingefroren sein (-20 °C). Beim Entfernen aus dem Gefrierschrank einen Gefrierblock verwenden.
Sonstige Hinweise
Folgen Sie dem Duolink® In-situ-Fluoreszenzprotokoll zur Anwendung dieses Produkts. Eine Kurzanleitung ist ebenfalls erhältlich.
Besuchen Sie unser Duolink® PLA-Informationszentrum, wo Sie Anleitungen zur Durchführung von Duolink® Versuchen, Anwendungen und Fehlerbehebungen und anderes finden können.
Wir können Ihnen Arbeit abnehmen! Informieren Sie sich über unser kundenspezifisches Serviceprogramm zur Beschleunigung Ihrer Duolink® Projekte
Komplette Duolink® Produktliste
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Rechtliche Hinweise
Cy is a registered trademark of Cytiva
Duolink is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
PLA is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
Signalwort
Danger
H-Sätze
P-Sätze
Gefahreneinstufungen
Resp. Sens. 1
Lagerklassenschlüssel
10 - Combustible liquids
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Artikel
Things to consider for preparation, setup and execution of the Duolink® assay protocol
Support information including tips and tricks, frequently asked questions, and basic troubleshooting.
Protokolle
This page details the Duolink® In Situ Short Protocol for fluorescence detection
In diesem Protokoll wird beschrieben, wie der Immunfluoreszenznachweis von Proteinen in Zellen und Gewebe durchgeführt wird.
This protocol describes how to perform immunofluorescent detection of proteins in cells and tissue.
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Applications to detect, quantify and visualize protein-protein interactions, post-translational modifications and low expression protein detection using proximity ligation assay
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Is there a variation in the intensity of the fluorophores recommended in the flow kits, where one may appear brighter compared to the others?
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