DUO92010

Duolink^® In Situ Probemaker MINUS

• Synonym(e): in situ Proximity Ligation Assay reagent, Protein Protein Interaction Assay reagent
• NACRES: NA.32
• UNSPSC Code: 12352200

Eigenschaften

• product line: Duolink^®
• Quality Segment: 200
• technique(s): immunofluorescence: suitable, proximity ligation assay: suitable
• suitability: suitable for brightfield, suitable for fluorescence
• shipped in: wet ice
• storage temp.: −20°C

Beschreibung

Application

Testen Sie Ihre Primärantikörper (IgG-Klasse, monoklonal oder polyklonal) in einem gebräuchlichen Immunfluoreszenz-(IF-), immunhistochemischen (IHC-) oder immunzytochemischen (ICC-)Assay, um die optimalen Fixierungs-, Blockierungs- und Titerbedingungen zu bestimmen. Duolink^®-In-situ-Reagenzien sind zur Anwendung auf fixierten Zellen, Zytospin-Zellen, auf Objektträgern gewachsenen Zellen, Formalin-fixierten Paraffinschnitten (FFPE) oder Gewebeschnitten (frisch oder gefroren) geeignet. Es ist keine Mindestanzahl von Zellen erforderlich.

Wir können Ihnen Arbeit abnehmen! lnformieren Sie sich über unser kundenspezifisches Serviceprogramm zur Beschleunigung der Duolink^®-Projekte

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To perform a complete Duolink^® PLA in situ experiment you will need two primary antibodies (PLA, IHC, ICC or IF validated) that recognize two target epitopes. Other necessary reagents include a pair of PLA probes from different species (one PLUS and one MINUS), detection reagents, wash buffers, and mounting medium. Analysis is carried out using standard immunofluorescence assay equipment.HRP is also available for brightfield detection.

Specificity
Duolink^® In Situ Probemaker extends your possibilities even further by allowing you to create your own PLA probes to meet specific assay requirements.

• Study homodimers
• Study protein-protein interactions with two primary antibodies derived from the same species
• Study protein-protein interactions with primary antibodies from any species

Using Duolink^® In Situ Probemaker PLUS and MINUS, you simply conjugate the PLUS and MINUS oligo arms directly to your antibodies in a quick and convenient procedure. As well as providing unique capabilities, this also means there is no longer any limitation as to which species your primary antibodies have to be derived from in order perform a Duolink^® In Situ assay.

Application Note
The antibody to be conjugated must have a concentration of 1 mg/ml. Do not use volumes larger than 20 ml for conjugation. The antibody must be in an amine free buffer, ideally PBS. The buffer should be carrier free but may contain up to 0.1% BSA, 5% trehalose, and 0.02% sodium azide.

• Study homodimers by using one monoclonal antibody split into two halves. Label one with the PLUS oligo and the other with the MINUS oligo.
• Use antibodies from same species: study protein-protein interactions, protein modifications, or single proteins, using two primary antibodies derived from the same species. Label one of the antibodies with the PLUS oligo and the other with the MINUS oligo
• Use antibodies from any species: study protein-protein interactions, protein modifications, or single proteins, using one or both primary antibodies derived from species other than mouse, rabbit or goat. Label one of your secondary antibodies with the PLUS oligo and the other with the MINUS oligo. Or, combine one labeled secondary antibody with a standard secondary Duolink^® In Situ PLA probe.

Test your primary antibodies (IgG-class, mono- or polyclonal) in a standard immunofluorescence (IF), immunohistochemistry (IHC) or immunocytochemistry (ICC) assay to determine the optimal fixation, blocking, and titer conditions. Duolink^® in situ reagents are suitable for use on fixed cells, cytospin cells, cells grown on slide, formalin-fixed, paraffin embedded (FFPE), or tissue (fresh or frozen). No minimum number of cells is required.

Let us do the work for you, learn more about our Custom Service Program to accelerate your Duolink^® projects

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Features and Benefits

• Keine Überexpression oder genetische Manipulation erforderlich
• Hohe Spezifität (weniger falsch-positive Ergebnisse)
• Einzelmolekül-Sensitivität durch RCA (Rolling Circle Amplification)
• Relative Quantifizierung möglich
• Keine Spezialgeräte erforderlich
• Schneller und einfacher als FRET
• Höhere Präzision als co-IP
• Publikationsreife Ergebnisse

Other Notes

Der Duolink^®Proximity Ligation Assay (PLA^®) ermöglicht den endogenen Nachweis von Protein-Interaktionen, posttranslationalen Modifikationen und Proteinexpressionswerten auf Einzelmolekülebene in fixierten Zellen und Gewebeproben.

Befolgen Sie für die Verwendung von Duolink^®In Situ Probemaker PLUS und MINUS das Duolink^®In Situ Probemaker-Protokoll. Dieses Produkt kann je nach verwendeten Detektionsreagenzien sowohl für das Duolink^® In-Situ-Fluoreszenzprotokoll als auch für das Duolink^® In-Situ-Hellfeldprotokoll angewendet werden. Weitere Informationen finden Sie unter Herstellung individueller (PLA^®-) Sonden.

Besuchen Sie unser Duolink^® PLA-Informationszentrum, wo Sie Anleitungen zur Durchführung von Duolink^® Versuchen, Anwendungen, Fehlerbehebung und mehr finden.

Dieses Produkt besteht aus folgenden Komponenten:

• Duolink^® In Situ Oligonukleotid MINUS – eine Flasche mit lyophilisiertem aktiviertem MINUS Oligonukleotid für eine Konjugation von 20 μg Antikörpern
• Konjugationspuffer – Puffer für die Konjugationsreaktion
• Stoppreagenz – stoppt die Konjugationsreaktion
• Aufbewahrungslösung – Puffer zum Aufbewahren der vorbereiteten PLA-Sonde (Antikörperkonjugat)
• 20x Assayreagenz – Das Reagenz wird der vom Experimentator optimierten Antikörper-Verdünnung hinzugefügt
• Blockierungslösung – blockiert die Probe vor der Färbung mit Duolink ^®In Situ
• PLA-Sonden-Verdünnung – Puffer zum Verdünnen der PLA-Sonde (Antikörperkonjugat) auf die endgültige Assay-Konzentration

Weitere Informationen entnehmen Sie bitte dem Datenblatt.

Legal Information

Duolink is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

PLA is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Sicherheitshinweise

• Piktogramme: GHS07,GHS09
• Signalwort: Warning
• Gefahrencodes: H317,H411
• Sicherheitshinweise: P261 - P272 - P273 - P280 - P302 + P352 - P333 + P313
• Hazard Classifications: Aquatic Chronic 2 - Skin Sens. 1
• Lagerklasse: 10 - Combustible liquids
• Was ist los?: WGK 3