AB16901

Anti-Grün fluoreszierendes Protein-Antikörper

Chemicon^®, from chicken

• Synonym(e): GFP, eGFP
• UNSPSC Code: 12352203
• NACRES: NA.41
• eCl@ss: 32160702
• Conjugate: unconjugated
• Clone: polyclonal
• Application: ICC, IP, WB
• Citations: 158

Eigenschaften

• biological source: chicken
• Quality Segment: 100
• conjugate: unconjugated
• antibody form: purified immunoglobulin
• antibody product type: primary antibodies
• clone: polyclonal
• species reactivity: vertebrates
• manufacturer/tradename: Chemicon^®
• technique(s): immunocytochemistry: suitable, immunoprecipitation (IP): suitable, western blot: suitable
• UniProt accession no.: P42212
• shipped in: wet ice
• target post-translational modification: unmodified

Beschreibung

General description

Das Molekulargewicht von GFP beträgt 27 kDa in Abhängigkeit vom Molekulargewicht des zu detektierenden Fusionsproteins.

Das grün fluoreszierende Protein (GFP) der Qualle Aequorea victoria wird als fluoreszierender Marker für die Überwachung der Genexpressionen in einer Vielzahl von zellulären Systemen verwendet, darunter in lebenden Organismen und fixierten Geweben. Anders als andere Biolumineszenz-Reporter fluoresziert GFP in Abwesenheit von Substraten, Cofaktoren oder anderen intrinsischen oder extrinsischen Proteinen. Aufgereinigtes GFP ist ein Monomer mit 27 kDa, der aus 238 Aminosäuren besteht und bei Anregung mit blauem oder ultraviolettem Licht ein grünes Licht abgibt (Emissionsmaximum bei 509 nm).

Immunogen

Ein rekombinantes grün fluoreszierendes Protein (GFP) mit einem 6-his-Tag wurde mittels Affinitätschromatographie in einer Nickel-Säule, gefolgt von Chromatographie in einer P-100 Gelfiltrations-Säule, hochgradig aufgereinigt. Bei Fraktionierung mittels SDS-PAGE und Visualisierung mit Coomassie-Brillantblau lag das resultierende Produkt nur als Einzelbande vor.

Application

Dieser gegen das grün fluoreszierende Protein gerichtete Antikörper (Anti-GFP-Antikörper) ist zur Verwendung in IC, IP und WB für die Detektion des grün fluoreszierenden Proteins validiert.

Forschungskategorie
Epitop-Tags & Allgemeine Verwendung

Forschungsunterkategorie
Epitop-Tags

Immunblotting: AB16901 detektiert eine Bande des richtigen Molekulargewichts (30 kDa) in Lysaten von GFP-exprimierenden E. coli, nicht aber von nicht exprimierenden E.coli, oder in Lysaten, die aus E. coli gewonnen wurden, die das GFP-exprimierende Plasmid in nicht induzierter Form enthalten; der Antikörper detektiert GFP in Lysaten von COS oder primären Neuronen oder Fibroblastenzellen, die mit Plasmiden zur Steuerung der Exprimierung von GFP oder einem tau-GFP-Fusionsprotein transfiziert sind. Es wurde kein Signal detektiert, wenn 50 μg Protein aus einem Rattenhirnlysat (Negativkontrolle) mithilfe von SDS-PAGE fraktioniert wurde. Bei Detektion mit einem sekundären, an Meerrettichperoxidase konjugierten Anti-Hühner-Antikörper mittels ECL oder kolorimetrischem Assay unter Verwendung von DAB lagen die Titer bei 10–20.000.

Immunzytochemie: GFP kann in Zellen detektiert werden, die mit einem Plasmid transfiziert sind, das die Exprimierung von GFP oder einem GFP-Fusionsprotein steuert. Zellen, die GFP nicht exprimieren, zeigen keine erkennbare Färbung. Die Antikörperbindung wurde unter Verwendung von Meerrettichperoxidase-konjugierten, sekundären Anti-Hühner-Antikörpern ermittelt und mithilfe von DAB visualisiert. Die Anti-GFP-Antikörper wurden in Verdünnungen von 1:2.500 bis 1:5.000 verwendet. Die Zellen wurden mit 4%igem Formaldehyd in PBS (pH 7,4) fixiert. Für die Immunzytochemie wurden die Kulturen bei Raumtemperatur 20 Minuten lang mit 4%igem Formaldehyd in PBS (pH 7,4) fixiert. Die Zellen werden bei Raumtemperatur 20 Minuten lang mit 0,2 % Triton X-100 und 2 % Serum (von dem Tier, in dem der sekundäre Antikörper gewonnen wurde) in PBS permeabilisiert. Anschließend werden die Zellkulturen mit primären Antiseren in PBS mit 2 % Serum (wie oben) bei 4 °C über Nacht inkubiert. Die Antikörperbindung wird mithilfe eines Avidin-/Biotin-/Peroxidase-Detektionssystems detektiert. Zwischen den Schritten wurden die Kulturen vier Mal gewaschen (jeweils 10 Minuten) und das Reaktionsprodukt wird 8–10 Minuten mit einer Lösung mit 0,05 % Diaminobenzidin / 0,02 % Wasserstoffperoxid auf Eis entwickelt. AB16901 wurde verwendet, um GFP in primären Neuronen und Fibroblasten von Zebrafischen zu detektieren.

Immunpräzipitation: 5 μg Antikörper pro maximal 500 μl Zelllysat. Es ist wichtig, sekundäre Anti-Hühner-Antikörper vom Kaninchen für die Erfassung oder Anti-Hühner-Beads zu verwenden, da Hühner-IgG nicht mit Protein A oder Protein G reagiert.

Optimale Arbeitsverdünnungen müssen vom Endanwender bestimmt werden.

Biochem/physiol Actions

AB16901 wird gegen hochreines natives GFP von Aequorea victoria hergestellt. Es reagiert mit GFP aus nativen wie auch rekombinanten Quellen.

Physical form

Ammoniumsulfatfällung

Aufgereinigtes Immunglobulin vom Huhn in TBS, pH 7,5 mit 0,02 % Natriumazid.

Format: Aufgereinigt

Preparation Note

Die unverdünnte Antikörperlösung ist bei einer Lagertemperatur zwischen 2 und 8 °C etwa 6 Monate haltbar.

Während der Lieferung können gelegentlich kleine Mengen des Produkts im Verschluss des Produktfläschchens eingeschlossen werden. Für Produkte mit Volumen von 200 μl oder weniger empfehlen wir, das Fläschchen vorsichtig auf eine harte Oberfläche zu klopfen oder das Fläschchen kurz in einer Tischzentrifuge zu zentrifugieren, um Flüssigkeit aus der Kappe des Behälter′s zu entfernen.

Analysis Note

Kontrolle
GFP-Fusionsprotein, in Zellen exprimiert

Other Notes

Konzentration: Die chargenspezifische Konzentration entnehmen Sie bitte dem Analysenzertifikat.

Legal Information

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Disclaimer

Sofern in unserem Katalog oder anderen Begleitdokumenten unserer Produkte nicht anders angegeben, sind unsere Produkte nur für Forschungszwecke vorgesehen und nicht für andere Zwecke zu verwenden, einschließlich, jedoch nicht beschränkt auf unautorisierte kommerzielle Verwendung, zur In-vitro-Diagnostik, für Ex-vivo- oder In-vivo-Therapiezwecke oder jegliche Art der Einnahme oder Anwendung bei Menschen oder Tieren.

Sicherheitshinweise

• Lagerklasse: 12 - Non Combustible Liquids
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