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ProteoExtract^® Kit für die subzelluläre Proteom-Extraktion

• Synonym(e): S-PEK-Kit
• NACRES: NA.77
• UNSPSC Code: 41106500

Eigenschaften

• usage: sufficient for 20 extractions
• manufacturer/tradename: Calbiochem^®
• storage condition: OK to freeze, avoid repeated freeze/thaw cycles
• technique(s): fractionation: suitable
• input: sample type: mammalian tissue(s); sample type: mammalian cultured cells
• shipped in: ambient
• storage temp.: 2-8°C

Beschreibung

General description

Schnelle und reproduzierbare Extraktion subzellulärer Proteome aus Säugetierzellen

Das ProteoExtract^®-Kit für die subzelluläre Proteomextraktion (S-PEK) ist für die schnelle und reproduzierbare Extraktion subzellulärer Proteome aus adhärenten und in Suspension angezogenen Säugetierzellen vorgesehen. Das S-PEK macht sich die unterschiedlichen Löslichkeiten bestimmter subzellulärer Kompartimente in den vier ausgewählten Reagenzien zunutze. Bei adhärenten Zellen wird das Verfahren direkt in der Gewebekulturschale durchgeführt, ohne die Zellen zuvor entnehmen zu müssen. Die Zellen bzw. ihre Bestandteile haften während der sequenziellen Extraktion der subzellulären Kompartimente so lange weiter an der Schale an, bis das für sie geeignete Extraktionsreagenz eingesetzt wird. So wird eine frühzeitige Zerstörung der Zellstruktur durch die enzymatische oder mechanische Ablösung der Zellen von der Gewebekulturschale und das damit verbundene Durchmischen verschiedener subzellulärer Kompartimente vermieden. Bei in Suspension angezogenen Zellen beginnt die Extraktion mit der vorsichtigen Sedimentierung und dem Waschen der Zellen. Die schrittweise Extraktion liefert vier separate Proteinfraktionen aus einer einzigen Probe:

• Zytosolfraktion (F1)
• Membran-/Organellenproteinfraktion (F2)
• Zellkernproteinfraktion (F3)
• Zytoskelettfraktion (F4)

Die Proteine werden in nativem Zustand gewonnen, sodass das S-PEK für viele nachfolgende Anwendungen wie 1D- und 2D-Gelelektrophorese, Immunblotting, Enzymaktivitäts-Assays und Protein-Microarrays geeignet ist.
Probengröße: 3–5 x 10⁶ oder 25–50 mg Gewebe.

Biochem/physiol Actions

Das Calbiochem ProteoExtract-Kit für die subzelluläre Proteomextraktion ist für die subzelluläre Extraktion von Säugetierproteinen aus folgenden Quellen vorgesehen: Zytosol-, Organellen- und Membran-, Zellkern- und Zytoskelettfraktionen adhärenter Gewebekulturzellen, suspendierte Gewebekulturzellen, gefrorene Zellpellets und fragmentiertes Gewebe.

Features and Benefits

• Schrittweise Extraktion liefert vier getrennte subzelluläre Proteome aus einer Probe
• Hoch reproduzierbar
• Keine Ultrazentrifugationsschritte
• Schnell—in nur 2 Stunden, einschließlich 45 Minuten Arbeitszeit
• Liefert für Funktionsstudien geeignete Proteine

Preparation Note

Für eine Extraktion erforderliche Kit-Komponenten


Das Volumen jeder Komponente, die für eine subzelluläre Extraktion erforderlich ist, hängt von der Menge des Ausgangsmaterials ab.

Geeignete Probenarten sind unter anderem:

• Adhärente Gewebekulturzellen
• Suspensionsgezüchtete Gewebekulturzellen
• Gefrorene Zellpellets
• Fragmentiertes Gewebe

Vor der Durchführung der Extraktion müssen alle gefrorenen Puffer bei Raumtemperatur aufgetaut werden. Ein Wasserbad mit 25 °C kann den Auftauvorgang unterstützen. Nach dem Auftauen die Puffer durch sanftes Schütteln oder Vortexen gut mischen.

Other Notes

Waschpuffer, Extraktionspuffer I, Extraktionspuffer II, Extraktionspuffer III, Extraktionspuffer IV, Proteaseinhibitoren-Cocktail, Benzonase^® Nuklease (Bestell- Nr. 71206) und eine Anwendervorschrift.

Zhang, L., und Insel, P. A. 2004. J. Biol. Chem.279, 20858.
Yuan, X., et al. 2002. Electrophoresis23, 1185.
Butcher, et al. 2001. J. Immunol.167, 2193.
Ott, et al. 2001. Pharmacogenomics J.1, 142.
Allen, L. 2000. Nature405, 819.
Dunn, M. J. 2000. Electrophoresis 6.
Rabilloud, T. 2000. Two-dimensional Gel Electrophoresis and Identification Methods Springer-Verlag
Mejdoubi, et al. 1999. Biochem. Biophys. Res. Comm.254, 93.
Reymond, et al. 1997. Electrophoresis18, 2842.
Laemmli, U. K. 1970. Nature227, 680.
Lowry, et al. 1951. J. Biol. Chem.193, 265.

http://www.expasy.ch/ und http://www.expasy.proteome.org.au

Legal Information

Benzonase is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

CALBIOCHEM is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

PROTEOEXTRACT is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Disclaimer

Toxizität: Mehrere Toxizitätswerte, siehe MSDS (O)

Sicherheitshinweise

• Hazard Classifications: Aquatic Chronic 3 - Eye Irrit. 2 - Skin Irrit. 2
• wgk: WGK 3