使用 Amicon^® 超離心過濾器快速濃縮抗體

引言

免疫球蛋白的純化方案通常包括與蛋白A或G層析介質親和、洗淨未結合的蛋白質，並使用低pH值緩衝液洗脫。純化後的抗體通常太稀釋，不適合下游研究或長期儲存。通常需要透析來濃縮抗體和/或將緩衝液換成能保持蛋白質活性的緩衝液。超滤可以更快地达到同样的效果，免疫球蛋白回收率高达 99%，并且可以一步去除盐分（请参阅浓缩、脱盐和缓冲液交换协议）。

方法和結果

使用 Prosep^® A 和 Prosep^® G 純化和濃縮兔 IgG Montage^® Antibody Purification Kits 和 Amicon^® Ultra-15 mL 離心過濾器。

A.使用 Montage^® Kits 純化 IgG

1. 將 Prosep^® A 或 Prosep^® G 純化。sup>® G 樹脂，然後在 500 xg 下旋轉 5 分鐘
2. 預先澄清血清樣本，通過 0.22 µm Steriflip^® GP 過濾器。
3. 用結合緩衝液 A 以 1:1 稀釋樣品，然後以 100-150 x g 離心 20 分鐘。
4. 用 20 mL 結合緩衝液 A 清洗旋轉柱，以 500 x g 離心 5 分鐘，去除未結合的雜質。
5. 將 10 mL 洗脱緩衝液 B2 加入新的離心管中，以 1.3 mL 中和緩衝液。
6. 使用適當的濃縮方法（如 280 nm 的紫外吸光度）測量樣品的總蛋白濃度。

B.使用Amicon^® Ultra-15 30kDa MWCO裝置濃縮IgG

1. 加入中和後的洗脱液。
2. 將中和洗脫部分加入Amicon^® Ultra 15 mL 30 kDa MWCO 裝置。
3. 在擺動桶轉子中以 4000 x g 離心 10 至 20 分鐘，或在固定角度轉子中以 5000 x g 離心 10 至 20 分鐘，直到樣品達到所需濃度。