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首頁蛋白質濃度與緩衝液交換使用超濾進行蛋白質富集的簡單策略

使用超濾進行蛋白質富集的簡單策略

人體血漿蛋白質體是發現和研究生物標誌物的龐大資源。傳統上,凝膠過濾層析法用於根據大小1,2分離蛋白質溶液。然而,凝膠過濾非常費力,受樣品大小的限制,而且耗時。它還會顯著稀釋樣品。超濾可以克服這些限制,超濾已被報導3-5 為製備低分子量(<10 kDa)馏分用於生物標記分析的樣品製備方法。

方法

在本實驗中,使用超濾設備從血清中富集低分子量(LMW)和高分子量(HMW)餾分。使用序列過濾方法(圖 1),在 Amicon® Ultra 4 mL 裝置 從 100 kDA 到 10 kDa MWCO 的範圍內,蛋白質通過遞減的分子量截止(MWCO)被分離。

序列分餾策略

結果

連續增益

與使用較低截留分子量設備的直接過濾相比,這種序列富集策略實現了蛋白質區分和提高了通量(圖 2,上圖)。與傳統的直接過濾相比,使用富集策略製備的樣本也顯示出更高的純度(圖 3,上圖)。這些數據表明,串聯超濾是一種可行的基於尺寸的蛋白質富集方法。

材料
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參考資料

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